[发明专利]鉴别太仓白蒜的分子特异性标记引物及方法

说明书

本发明公开了一种用于鉴定太仓白蒜的分子鉴别方法和引物。该方法是提取待鉴定样品DNA后，利用一对序列分别如SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示的特异性分子标记SCAR引物，通过常规的PCR方法进行扩增，并进行琼脂糖凝胶电泳检测，若能得到长度为920bp的一条DNA条带则待鉴定样品为太仓白蒜，若不能扩增到该条带则待鉴定样品不是太仓白蒜。本发明操作简便、稳定可靠，能够弥补传统形态鉴别方法的不足，实现对大蒜地方品种太仓白蒜的快速、准确鉴定，同时对保护地理标志产品的种质资源具有重要的意义。

技术领域

本发明属于分子标记鉴定领域，涉及一对用于鉴别大蒜品种太仓白蒜的ISSR-SCAR引物及鉴定方法。

背景技术

大蒜(Allium sativum L.)为单子叶百合科葱属多年生草本植物，是一种重要的经济作物，其蒜头、蒜薹、蒜苗均可作为蔬菜食用，同时蒜头还是常用的调味品。此外，大蒜还被认为具有杀菌、抗氧化、预防癌症和降低胆固醇等功效。作为一种药食两用的重要作物，大蒜在世界范围内广为种植，中国是它的主要生产国之一。长期以来经过人工选育和自然选择，形成了变异丰富的品种资源，不同大蒜品种在抽薹期、产量、风味及抗病性等重要经济性状方面差异较大，但由于品种繁多、缺乏统一的分类标准，给大蒜的栽培和品种选育工作造成了极大的困难，为了更好地指导生产实践并为优良种质资源的保护提供科学依据，就需要一种可靠、有效的鉴别手段。

太仓白蒜是江苏省苏州市太仓县选育的大蒜品种，栽培历史悠久，是中国四大名蒜之一，约占全国出口大蒜总量的三分之一。太仓白蒜具有蒜头直径大、蒜瓣少、圆整光滑、味辣、色白、休眠期长、耐贮存等优点，是具有重要经济价值的地方名优品种。过去人们常常依据抽薹方式、蒜头形态、蒜衣颜色等形态性状对其进行鉴别，然而与形态外观相似的品种间仍难以区分，且形态特征常常受到很多制约，在实际应用中可操作性不强。因此，急需开发能够快速、高效鉴别太仓白蒜的特异性分子标记。

分子标记技术是以DNA分子多态性为基础的一种遗传标记，具有多态性高、稳定性好、可重复、专一性强等优点，近年来发展十分迅速。其中SCAR(序列特异性扩增)标记操作简单、成本低、方便快捷，被广泛应用于一些形态上难以区分的农作物及药源植物品种的鉴别，在西洋参、茶树、芋头、青菜等等许多植物品种的鉴定中取得了成功。尚未见太仓白蒜的分子特异性标记的报道。

发明内容

本发明的目的是针对目前缺少对大蒜品种进行准确鉴定有效手段的状况，提供一种鉴定苏州地方名优大蒜品种——太仓白蒜的特异性分子标记方法。通过筛选到的ISSR引物在太仓白蒜中扩增出特异性条带，并基于该特异性条带设计SCAR引物，利用这对引物可通过简单的PCR扩增技术将太仓白蒜和其他8个大蒜品种区分开来，实现对太仓白蒜的快速、准确鉴定。该发明为大蒜的品种鉴别和种质资源保护提供了有力的技术支持。

本发明涉及一条能够在太仓白蒜中扩增出特异性条带的ISSR引物，其核苷酸序列为SEQ ID NO:1所示。该引物是通过使用69条ISSR引物在9个大蒜品种中进行PCR扩增，筛选到的能够在太仓白蒜中检测到特异性条带的引物。

本发明涉及一个太仓白蒜特异性DNA片段，其核苷酸序列为SEQ ID NO.2所示。该片段是使用核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示的ISSR引物在太仓白蒜中扩增出一条特异性条带，对该条带进行切胶回收和克隆测序获得的长度为1710bp的核苷酸序列。

本发明涉及一对特异性鉴别太仓白蒜的SCAR引物，其中上游引物为SEQ ID NO.3所示，下游引物为SEQ ID NO.4所示，分别对应于SEQ ID NO.2片段的343-363nt及1250-1270nt位点，其扩增产物长度约为920bp。