[发明专利]一种库页悬钩子不定芽组织培养快速繁殖方法

说明书

本发明公开了一种库页悬钩子不定芽组织培养快速繁殖方法。本发明选择库页悬钩子不定芽作为外植体，经过外植体的消毒、诱导与增殖、生根诱导过程，最终得到库页悬钩子试管苗。本发明的优点在于繁殖快、成活率高、保护环境，并不受季节、土壤、水分等影响。本发明不仅为库页悬钩子组织快繁技术开辟了一条新道路，也为库页悬钩子人工规模化种植奠定基础，同时也对库页悬钩子种质资源保护、开发和利用具有重要意义。

技术领域

本发明涉及植物繁育技术领域，具体涉及一种库页悬钩子不定芽组织培养快速繁殖方法。

背景技术

库页悬钩子(Rubus sachalinensis Lévl.)是蔷薇科(Rosaceae)悬钩子属(Rubus)灌木，生于海拔1000～2500米山坡潮湿地密林下、林间草地或干沟石缝中，分布于我国内蒙古、黑龙江、吉林、河北、甘肃等地。

库页悬钩子的茎叶、根及果实均可入药：茎叶具有止血、解毒、消炎、祛风湿功效；根具有止血止带功效；果实具有固精、缩尿功效。其中本品干燥茎为常用蒙药材之一，名为悬钩子木，蒙古名博格日勒吉根，味甘、辛，性平、软，具有解表、调元、止咳之功效，收载于《中华人民共和国卫生部药品标准·蒙药分册》中，主要用于治疗感冒、咳嗽、未成熟热，“赫依”热等疾病。悬钩子木临床常用于蒙药经典方剂“四味土木香散”(《中国药典》(一部)附录项)，为其组方中的倒挂品种。

药材悬钩子木全部来自野生采挖，不科学的釆挖方式造成库页悬钩子野生资源严重破坏，蕴藏量急剧减少，加强野生资源保护迫在眉睫。组织快繁体技术可为解决其资源匮乏提供有效的途径，目前，国内尚未见有关库页悬钩子组织快繁及其野生抚育的报道。

发明内容

本发明所要解决的问题如何在短时间内培育出大量优质且遗传性质稳定的库页悬钩子种苗，进而有效解决其野生资源匮乏问题。

为解决上述问题，本发明提供了一种库页悬钩子不定芽组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：

1)将库页悬钩子不定芽接种至增殖培养基中进行不定芽增殖培养，得到丛生芽；所述增殖培养基包括6-苄氨基嘌呤、激动素、萘乙酸和吲哚丁酸；

2)将所述丛生芽剪切成单芽茎段，并将所述茎段接种至生根培养基中进行生根培养，得到库页悬钩子幼苗；所述生根培养基包括萘乙酸和吲哚丁酸。

上述方法中，所述6-苄氨基嘌呤在所述增殖培养基中的浓度为0.1～2.0mg/L；优选为0.5～1.0mg/L；更优选为0.5mg/L或1.0mg/L；

所述激动素在所述增殖培养基中的浓度为0～1.0mg/L；优选为0～0.5mg/L；更优选为0mg/L、0.1mg/L或0.5mg/L；

所述萘乙酸在所述增殖培养基中的浓度为0～0.5mg/L；优选为0.05～0.2mg/L；更优选为0.05mg/L、0.1mg/L或0.2mg/L；

所述吲哚丁酸在所述增殖培养基中的浓度为0～0.5mg/L；优选为0.05～0.2mg/L；更优选为0.05mg/L、0.1mg/L或0.2mg/L；

所述萘乙酸在所述生根培养基中的浓度为0～1.0mg/L；优选为0.5mg/L；

所述吲哚丁酸在所述生根培养基中的浓度为0～1.5mg/L；优选为0.1mg/L。

上述方法中，所述增殖培养基和所述生根培养基均还包括蔗糖和琼脂；

所述增殖培养基是将MS盐、6-苄氨基嘌呤、激动素、萘乙酸、吲哚丁酸、蔗糖、琼脂和水混匀得到的培养基；

所述生根培养基是将1/2MS盐、萘乙酸、吲哚丁酸、蔗糖、琼脂和水混匀得到的培养基；

所述蔗糖在所述增殖培养基和所述生根培养基中的浓度均为20～30g/L；优选为20g/L；