[发明专利]一种抗精子抗体检测方法

说明书

本申请公开一种抗精子抗体检测方法，包括：步骤一：血清提取及试剂准备；步骤二：准备包被孔与未包被孔，将步骤一准备的试剂中的稀释后的标准品、质控物及已稀释血清至包被孔与被包被孔中，水溶下进行第一次温育；步骤三：根据所述步骤二中温育后的溶液孵育后，清洗并干燥微孔条，在所述微孔条每孔中加入稀释后酶标记抗体100u1，水浴进行第二次温育；步骤四：清洗并干燥微孔条，每孔中加入底物液100u1，避光室温显色10－15分钟；步骤五：每孔中加入终止液50u1，在酶标仪波长450nm比色读消光系数；步骤六：结果读取为0‑75U/ml判读为正常；操作简单便利并且灵活、降低检测成本，减少步骤流程，提高劳动效率，流程科学，标准明确，实践操作效果好。

技术领域

本发明属于基因检测领域，具体是指一种抗精子抗体检测方法。

背景技术

抗精子抗体既可在女性也可在男性体内产生。男性产生AsAb的主要机制是血屏障因疾病或创伤受损，使隐藏的精子或其可溶性膜抗原逸出，刺激机体免疫系统产生抗精子自身免疫抗体，简称AsAb。AsAb可抑制精子活动或受精，引起男性不育。女性产生AsAb的主要机制是正常生殖道中能降解精子抗原的酶系统缺陷，致使进入的精子抗原得以保存完整，而作为同种异体抗原剩激女性免疫系统则产生AsAb，影响生育。

人类精子抗原十分复杂，包括附着于精子表面的“精子附着抗原”和精子核抗原、胞质抗原、膜固有抗原等，共100余种，其中有些是精子特有的，有些是非特异性的有些与生育有关，有些无关。这些抗原均能引发机体产生相关抗体，抗精子抗体按其对精子的作用分为凝集性、制动性和结合性3类。

通常不育症患者血清中AsAb检出率为20％－30％左右，而在梗阻性无精患者中，AsAb患者，AsAb阳性率可高达60％。不孕患者血清与精浆中AsAb的1g种类有所不同，血清中通常以IgM、IgG类为主；而精浆中则以1gG、IgA类出现较多。

AsAb阳性也可见于其它原因，如输精管阻塞以及睾丸和附睾的损伤和炎症。鉴于AsAb的异质性以及其中很多AsAb针对的靶抗原与生育并不相关，因此，AsAb的阳性结果必须结合临床综合考虑。

因此，如何研发一种抗精子抗体检测方法，能够解决上述问题，便成为亟待解决的技术问题。

发明内容

本申请解决的主要问题是提供一种抗精子抗体检测方法，操作简单、流程科学，标准明确，实践操作效果好，以解决一种抗精子抗体检测方法成本高、流程不科学，标准不明确，实践操作效果不佳、操作难度高、难以复制操作的技术问题。

为了解决上述技术问题，本发明公开了一种抗精子抗体检测方法，其特征在于，包括：

步骤一：血清提取及试剂准备；

步骤二：准备包被孔与未包被孔，将步骤一准备的试剂中的稀释后的标准品、质控物及已稀释血清至包被孔与被包被孔中，水溶下进行第一次温育；

步骤三：根据所述步骤二中温育后的溶液孵育后，清洗并干燥微孔条，在所述微孔条每孔中加入稀释后酶标记抗体100u1，水浴进行第二次温育；

步骤四：清洗并干燥微孔条，每孔中加入底物液100u1，避光室温显色10－15分钟；

步骤五：每孔中加入终止液50u1，在酶标仪波长450nm比色读消光系数；

步骤六：结果读取为0-75U/ml判读为正常。

进一步的，所述步骤三和步骤四中的清洗并干燥微孔条包括：将微孔条在滤纸上轻轻拍打以除去微孔中的残液.采用挤压式清洗瓶，则让每个微孔充满清洗液，然后弃去清洗液.在清洗过程中应避免气泡的产生.重复清洗操作两次以上，最后在滤纸上拍干微孔条。

进一步的，还包括质控步骤：

每次实验均要进行高低浓度质控，并绘制质控图；