[发明专利]一种用于检测浸润性膀胱癌的标志物及其应用

说明书

本发明涉及一种用于检测浸润性膀胱癌的标志物及其应用，所述标志物为印记基因Grb10和/或印记基因Diras3。本发明标志物可以准确检测膀胱癌的浸润性，对膀胱癌的手术方式选择具有指导作用，可以减少手术后的复发和转移；本发明检测方法区别于免疫组化方法，减少了假阳性和其他负面作用，不仅如此，通过发现的膀胱癌浸润性相关印记基因缺失位点的致该基因沉默、剔除、重排的靶向药物或技术方法，可用于指导后期的治疗和用药。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，涉及基因诊断领域，涉及一种检测肿瘤的标志物，具体涉及一种用于检测浸润性膀胱癌的标志物及其应用。

背景技术

膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤，发病率居泌尿系统恶性肿瘤的首位。据世界卫生组织(WHO)统计，2012年全球新增病例429,793例，死亡165,084例，中国新诊断55,486例，死亡26,820例(World Cancer Report 2014)。临床上新诊断的膀胱癌85-90％都是非肌层浸润性膀胱癌，虽然第一次手术切除后复发率高达75％，但较少发生肌层浸润，也很少发生转移，而另外10-15％为肌层浸润性膀胱癌，最终会发生远处转移，危及生命。对于非肌层浸润性膀胱癌，只要按时进行膀胱镜检查，发现复发后及时在膀胱镜下切除，生存率一般较高。对于肌层浸润性膀胱癌，需要进行较大范围的膀胱手术切除甚至全膀胱切除，并结合放化疗，才能得到较好的疗效。因此，如果能够在早期检测出膀胱癌是否会发生肌层浸润，对治疗方法的选择具有重要指导意义，能够挽救病人的生命。

基因组印记是表观遗传学中基因调控的一种方式。其特点是，通过甲基化来自特定亲代的等位基因，使某个基因只有一个等位基因表达，而另一个则陷入基因沉默状态。该种类的基因，被称为印迹(记)基因。印迹缺失是印迹基因去甲基化导致沉默状态的等位基因被激活并且开始基因表达的一种表观遗传改变。大量研究表明，该现象(印迹缺失)普遍存在于各类癌症并且发生时间早于细胞和组织形态改变。与此同时，在健康细胞中，印迹缺失比例极低，与癌细胞成鲜明对比。所以，印迹基因的甲基化状态可以作为病理标记，通过特定分子检测技术，对细胞异常状态进行分析。

由于印迹基因的功能涵盖细胞信号传递、细胞周期调控、细胞内外物质运输、细胞外基质形成等多个方面，所以在不同的癌症中印迹基因所表现的作用有所不同，表达的量也相差很大，故儿形成了不同的敏感性和特异性，对肿瘤发生发展中的浸润和转移及预后起了巨大的作用。

基于上述原因，目前的膀胱癌的浸润性或非浸润性并没有明显区分的诊断标志物，解析膀胱癌的浸润性或非浸润性在细胞层面上存在的分子标记物变化，以此提供更精确的预诊和诊断信息。

发明内容

针对现有技术的不足及实际的需求，本发明提供了一种用于检测浸润性膀胱癌的标志物及其应用，通过采用印记基因的检测，能够区分膀胱癌的浸润和非浸润性，为后续的治疗提供依据。

为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

第一方面，本发明提供一种浸润性膀胱癌的标志物，所述标志物为印记基因Grb10和/或印记基因Diras3。

本发明中，通过对印记基因Grb10和印记基因Diras3进行总表达量、印记基因缺失表达量和印记基因拷贝数异常表达量的计算，以印记基因Grb10和印记基因Diras3的拷贝数异常表达量比值作为膀胱浸润因子(BIF,Bladder Infiltration Factor)，从而判断膀胱癌的浸润性，浸润因子越高，表明膀胱癌的浸润性越大。

根据本发明，所述印记基因的总表达量、印记基因缺失表达量和印记基因拷贝数异常表达量的公式如下：

总表达量＝(b+c+d)/(a+b+c+d)×100％；

正常印记基因表达量＝b/(b+c+d)×100％；

印记基因缺失基因表达量＝c/(b+c+d)×100％；