[发明专利]一种测定动物源性食品中氨基糖苷类药物残留的方法

说明书

本发明涉及一种测定动物源性食品中氨基糖苷类药物残留的方法，包括样品中残留的氨基糖苷类药物采用磷酸盐缓冲溶液提取，SupelMIP SPE‑Aminoglycosides固相萃取柱富集净化，SIELC ObeliscR色谱柱和Hypercarb色谱柱分离，高效液相色谱‑串联质谱进行测定。本发明所述的测定动物源性食品中氨基糖苷类药物残留的方法，可以同时检测出动物源性食品中16种氨基糖苷类药物残留情况。相对于反相色谱法分析该类药物，本方法检测过程全程不添加离子对试剂，具有不污染质谱仪的优势；相对于亲水作用色谱法，本方法具有灵敏度高，峰型好，响应强，分析药物种类多的优势。

技术领域

本发明涉及一种氨基糖苷类抗生素(AGs)的检测技术，尤其是一种测定动物源性食品中氨基糖苷类药物残留的方法。

背景技术

氨基糖苷类抗生素(AGs)是一类含有氨基糖苷键的抗生素，抗菌谱广，对需氧革兰阴性杆菌、绿脓杆菌具有强大的抗菌活性，目前已有数十个天然抗生素或半合成品种。天然的氨基糖苷类抗生素由链霉菌、小单孢菌和细菌产生，包括链霉素、卡那霉素、妥布霉素、大观霉素、新霉素、庆大霉素、西索米星、阿司米星等；半合成氨基糖苷类抗生素包括阿米卡星、奈替米星等。氨基糖苷类抗生素由于其高效和低价，是当今世界使用最为普遍的抗生素种类之一，广泛用于养殖业中，也常添加到饲料中作为动物促生长剂使用。AGs的副作用是严重的耳毒性和肾毒性、对神经肌肉传导的阻滞、以及损害肠道影响其吸收功能。此外，此类化合物与组织的亲和力强，导致残留时间较长，消费者如果食用了AGs残留超标的动物性食品，会带来潜在的危害。欧盟明确规定禁止将氨基糖苷类抗生素作为促生长添加剂使用，美国FDA因该类药物的毒副作用及容易产生耐药性，对蜂产品中该类药物的残留极为关注。近年来我国也加强了对蜂产品中该类药物的残留监控。由于一些蜂农不科学地使用氨基糖苷类药物来防治蜜蜂幼虫病，从而导致蜂产品中氨基糖苷类药物残留的超标，因此，监控蜂产品中的氨基糖苷类药物残留具有十分重要的意义。

发明专利CN106053638B公开了一种动物源食品中氨基糖苷类抗生素残留量的检测方法，适用于新霉素、大观霉素、双氢链霉素、链霉素、庆大霉素、安普霉素等6种抗生素的检测，不适用于巴龙霉素、核糖霉素等其他10余种氨基糖苷类抗生素的检测，该方法对动物源食品中的氨基糖苷类抗生素的检测类别有限，不能准确表征或者指示食品中氨基糖苷类抗生素的真实情况。此外，该专利方法采用亲水作用色谱柱对新霉素、大观霉素、双氢链霉素、链霉素、庆大霉素、安普霉素等6种抗生素进行分析，方法的检测下限为100ug/kg，灵敏度较低，不能满足实际监控要求。

发明内容

氨基糖苷类抗生素由氨基糖与碱性1,3-二氨基肌醇以苷键结合而成，1,3-二氨基肌醇为碱性多元环己醇结构，因此氨基糖苷类抗生素均具有碱性和强极性的特点。目前，在传统的反相色谱-质谱检测中，通常在流动相或者样品中加入离子对试剂，如七氟丁酸等，来促进药物的离子化，从而通过离子对色谱模式来进行检测，增加目标物在柱子上的保留。或者采用HILIC模式，通过在流动相中加入高浓度的盐(如甲酸铵)以改善色谱行为，如发明专利申请CN108519456A。但离子对试剂对质谱检测器的影响很大，可导致离子抑制、离子源污染等。因此该类药物的分离检测，这也是目前检测工作人员面临的挑战之一。

本发明的目的是为了克服现有的检测方法中对氨基糖苷类抗生素的检测类别有限，无法一次获取至少10种氨基糖苷类抗生素的残留情况，提供一种测定动物源性食品中氨基糖苷类药物残留的方法。本发明相对于反相色谱法(需在流动相中添加离子对试剂)具有不污染质谱仪的优势，相对于亲水作用色谱法具有灵敏度高，峰型好，响应强，分析药物种类多的优势。

本发明选择了16种氨基糖苷类药物作为研究对象，采用液相色谱串联质谱法进行同时检测，全程在不添加离子对试剂的条件下，采用SIELC Obelisc^TMR和Hyercarb色谱柱对氨基糖苷类药物具有很好的保留和分离效果，可对16种氨基糖苷类抗生素进行分离检测，该方法简单、快速、适应性强。

具体方案如下：