[发明专利]一种从螺旋藻中同时分离纯化出藻蓝蛋白和多糖的方法

权利要求书

1.一种从螺旋藻中同时分离纯化藻蓝蛋白和多糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1，将螺旋藻进行破壁产生藻液，藻液进行固液分离，所得液体为藻蓝蛋白与第一部分多糖混合粗提液，所得固体作为提取纯化第二部分多糖使用；

S2，将步骤S1中获得的液体进行超滤，透过液为第一部分多糖溶液；浓缩液中加入适量硫酸铵混匀，静置后离心，获得上清液一；将步骤S1中获得的固体溶于水，调节pH至碱性，进行碱提破壁，再将其离心，获得上清液二，所得上清液二为第二部分多糖粗提液；

S3，向步骤S2中的上清液一中加适量硫酸铵混匀，静置后离心，获得沉淀；调节步骤S2中的上清液二的pH至酸性，静置后离心，获得上清液三；

S4，将步骤S3中的沉淀用磷酸盐缓冲溶液溶解，并用去离子水作为脱盐流动相进行脱盐，脱盐后的溶液为藻蓝蛋白初纯化溶液；

S5，将步骤S4的藻蓝蛋白初纯化溶液，过聚丙烯酸脂层析柱，用洗脱液进行梯度洗脱，分别收集洗脱液的组分，检测各组分中藻蓝蛋白的纯度和浓度，将富含藻蓝蛋白的组分用磷酸盐缓冲液作为流动相进行脱盐，以获得藻蓝蛋白纯化溶液；

S6，将步骤S3的上清液三，过聚丙烯酸脂层析柱，进行吸附杂蛋白，收集穿透峰，得第二部分多糖溶液；在将第二部分多糖溶液与步骤S2获得的第一部分多糖溶液合并，浓缩得多糖；

S7，将步骤S5中获得的藻蓝蛋白纯化溶液过羟基磷灰石层析柱，用洗脱液进行梯度洗脱，分别收集洗脱液组分，合并得高纯度藻蓝蛋白。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S1包括：将螺旋藻干粉按照料液比1：20加入0.02mol/L的pH7.0磷酸盐缓冲溶液，搅拌溶胀5h；再将搅拌溶胀后的溶液进行离心，分离得所述液体和所述固体。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤S2包括：将步骤S1中获得的液体用5KDa进行超滤，透过液为第一部分多糖溶液，浓缩液中加入硫酸铵至饱和度为20%，混匀，静置后离心，弃沉淀，取上清液一；将步骤S1中获得的固体按照固液比1:20加入水，并用1M氢氧化钠调节pH12，搅拌提取2h之后离心，取上清液二。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S5采用0.02mol/L、pH＝7.0、3～5倍柱体积的磷酸盐缓冲液平衡弱阴离子聚丙烯酸脂层析柱，平衡后，将藻蓝蛋白初纯化溶液上样，上样量为柱床体积的1/3～2/3；用含2M氯化钠的0.02M、pH=7.0的磷酸盐缓冲溶液进行梯度洗脱，洗脱线速度为200~300cm/h。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S6采用0.02mol/L、pH＝4.0、3～5倍柱体积的醋酸-醋酸铵缓冲液平衡强阳离子聚丙烯酸脂层析柱，平衡后上样，上样量为柱床体积的1/3～2/3；上样后经过一个穿透峰开始收集一个穿透峰，洗脱线速度为200~300cm/h。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S7采用0 .01mol/L、pH＝7.0、3～5倍柱体积的磷酸盐缓冲液平衡羟基磷灰石层析柱，平衡后，将步骤S5中的藻蓝蛋白纯化溶液上样，上样量为柱床体积的1/3～2/3。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S4中磷酸盐缓冲液的浓度为0.02mol/L，pH为7.0，选用Sephadex G-25脱盐柱进行脱盐。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S3中向上清液一中加硫酸铵只饱和度为40%，用1M HCl将上清液二的pH值调至4。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述离心操作在4℃下进行。