[发明专利]一种低分子量条斑紫菜多糖的制备及其在抗人宫颈癌细胞肿瘤中的应用

说明书

本发明涉及一种低分子量条斑紫菜多糖的制备及其在抗人宫颈癌细胞肿瘤中的应用，其属于生物化学领域；其技术要点在于先用热水煮提法提取大分子的条斑紫菜多糖，通过γ‑射线辐射将其降解成小分子多糖；其主要用途在于抗人宫颈癌细胞肿瘤中的应用；本发明提供的一种低分子量的条斑紫菜多糖的制备方法提取工艺简单，适宜工业化生产；其制备出来的条斑紫菜多糖则具有较好的抗肿瘤功能，无细胞毒性，安全可靠。

技术领域

本发明涉及到生物化学领域，具体涉及一种低分子量条斑紫菜多糖的制备方法和应用。

背景技术

条斑紫菜来源广泛，在沿海大部分地区都有分布，包括中国、韩国和日本。它是一种营养丰富的可食用海藻，含有大量的蛋白、多糖等物质。其中，条斑紫菜多糖应用广泛，涉及到工业和医用材料等方面。条斑紫菜多糖还具有抗肿瘤、抗病毒、降血脂的生物学功能。近年来，伴随着生物技术的发展，条斑紫菜多糖的制备方法日新月异，包括膜分离法、煮提法(水、碱液)等。但是这些制备方法大都提取的是大分子多糖。大分子多糖的生物利用度低，不利于条斑紫菜多糖进一步往功能性食品或药品等方向发展。近来，酶法和超声提取法广泛应用于小分子多糖的制备。但是这些制备方法的成本较高，工艺要求高，并且稳定性差，耗时长。同时，制备小分子多糖的过程中，活性基团和多糖组成被破坏严重，而且降解过程中变量过多，例如硫酸根、分子量等的同时变化，造成产品的可控性较差。这些给进一步的活性研究和结构解析造成了一定的困难，所以这些方法不适合小分子多糖制备工艺的扩大应用和深入的活性研究。

人体时常处于有害的环境中，当自身抵御能力降低时，容易引起肿瘤的发生和发展。虽然机体自身具有抵抗的能力，但是这种能力是有限的。为了避免造成不可逆的损伤，机体可以摄取具有抗肿瘤能力的食品或药品，协助并增强机体自身的抵御能力，更好地抵抗有害物质的损伤。但不同生产工艺生产的多糖，生物学功能不同，生物利用度也不同。低分子量的多糖生物利用度高，容易消化吸收，减轻机体的代谢负荷，能够更好的发挥其生物学功能。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有的技术状况，提供一种低分子量的条斑紫菜多糖的制备方法。该多糖具有较好的抗肿瘤功能，无细胞毒性，安全可靠，提取工艺简单，适宜工业化生产。

针对条斑紫菜多糖本身，一种低分子量条斑紫菜多糖制备方法，其特征在于包括下述步骤：

1)冷冻的条斑紫菜在70℃下烘干，打碎成粉，过40目筛；

2)将步骤1得到的藻粉按照粉末(m):95％乙醇(v)＝1:5的料液比在60℃的条件下回流，脱脂2h，除去乙醇，重复上述步骤2次，最后烘干藻粉；

3)将脱脂的藻粉按照粉末(m):去离子水(v)＝1:30的料液比，在80℃的条件下煮提，2h/次，分离料渣并重复上述煮提步骤1次，收集并合并2次煮提液；

4)将上述煮提液，在60℃的条件下减压浓缩，浓缩至煮提液总体积的1/4，得到浓缩液；

5)将上述浓缩液，按照浓缩液(v):95％乙醇(v)＝1:4的液体体积比，在4℃的条件下醇沉12h后，得到固液混合物；

6)将上述的固液混合物，4000r/min离心15min，得到沉淀；

7)将上述沉淀在60℃条件下，烘干，得到条斑紫菜多糖；

8)检测该条斑紫菜多糖的性质，得到该条斑紫菜多糖分子量为2.3-350kDa，该条斑紫菜多糖是具有硫酸基的α-和β-构型吡喃基团构成的杂多糖，主要由鼠李糖、葡萄糖、半乳糖和岩藻糖组成，硫酸基含量为10％；

9)将上述的条斑紫菜多糖，用去离子水配置成5％的条斑紫菜多糖溶液，使多糖含量达172μg/mL，利用γ-射线进行辐射降解，每组辐射率为10kGy/h，总辐射量为20kGy-100kGy；