[发明专利]一种新型赖氨酸特异性内切酶及其制备方法有效
| 申请号： | 201811394022.5 | 申请日： | 2018-11-21 |
| 公开（公告）号： | CN109439643B | 公开（公告）日： | 2020-12-04 |
| 发明（设计）人： | 赖红星;马文柱;夏玉平;姚元锋;雷春红;肖拥军;罗湘冀 | 申请（专利权）人： | 珠海冀百康生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/64 | 分类号： | C12N9/64;C12N15/57;C12N15/70 |
| 代理公司： | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人： | 陈慧华 |
| 地址： | 519000 广东省珠海市金湾区*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 新型 赖氨酸 特异性 内切酶 及其 制备 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种赖氨酸特异性内切酶，其特征在于，该酶的结构为：赖氨酸特异性内切酶核心-连接肽-组氨酸标签；
所述连接肽为GGGGSGGGGSGGGGS；
所述组氨酸标签为5个连续的组氨酸；
该酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。
2.一种如权利要求1所述的赖氨酸特异性内切酶的制备方法，其特征在于，其步骤如下：
1)构建含有该赖氨酸特异性内切酶编码基因的重组载体；
2)将重组载体导入大肠杆菌宿主细胞，得到重组大肠杆菌细胞；
3)对重组大肠杆菌细胞进行发酵培养，加入诱导剂，收集经表达后的重组大肠杆菌细胞；
4)高压均质破碎步骤3)得到的重组大肠杆菌细胞，得到含有新型赖氨酸特异性内切酶的细胞悬液；
5)对含有新型赖氨酸特异性内切酶的细胞悬液进行纯化、冷冻干燥，得到赖氨酸特异性内切酶粉末。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤1)中所述重组载体包含T7启动子或T7lac启动子、编码权利要求1所述的赖氨酸特异性内切酶的多核苷酸分子以及位于所述多核苷酸分子下游的T7终止子，其中所述多核苷酸分子位于所述启动子的下游。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤3)中所述诱导剂为0.3mM的IPTG。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤5)中所述纯化方法为高压均质、镍柱亲和层析。
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