[发明专利]深海来源的菌株及其编码的β-半乳糖苷酶基因和应用

权利要求书

1.一种深海来源的菌株，其特征在于所述菌株为交替单胞菌ML117，该菌株于2017年12月14日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO: M2017788。

2.根据权利要求1所述的一种深海来源的菌株，其特征在于所述菌株的16S rRNA核苷酸序列如SEQ ID No:1所示。

3.一种编码β-半乳糖苷酶的核苷酸序列，其核苷酸序列如SEQ ID No:2所示，所述核苷酸序来源于权利要求1所述的交替单胞菌ML117。

4.权利要求3所述核苷酸序列编码的β-半乳糖苷酶，其氨基酸序列如SEQ ID No:3所示。

5.一种重组表达载体，它包含了权利要求3所述的SEQ ID No:2核苷酸序列；重组表达载体为pET-bgal。

6.一种重组菌，它包含了权利要求3所述的SEQ ID No:2核苷酸序列，所述的重组菌株来源为大肠杆菌BL21(DE3)。

7.利用权利要求3所述编码β-半乳糖苷酶的核苷酸序列制备重组β-半乳糖苷酶的方法，步骤如下：

（1）将权利要求3所述编码β-半乳糖苷酶的基因序列SEQ ID No:2克隆到大肠杆菌表达载体pET-24a中，构建重组表达载体pET-bgal，将表达载体转化到大肠杆菌BL21(DE3)中，用卡那霉素抗性筛选出含β-半乳糖苷酶基因的重组菌株；

（2）将步骤（1）筛选出的菌株接种于LB液体培养基中，37℃培养10-12小时，获得种子液；将种子液以体积比1%-2%的量接种于LB液体培养基中，待生长到OD₆₀₀为0.6-0.8时，加入终浓度0.1-1 mmol/L的IPTG诱导，诱导温度为16-37℃，诱导时间为3-16小时；

（3）收集步骤（2）诱导后获得的菌体，超声破碎后，使用亲和层析柱对重组β-半乳糖苷酶进行纯化，获得电泳纯的重组β-半乳糖苷酶。

8.权利要求7所述重组β-半乳糖苷酶在牛奶添加剂中的应用。

9.一种含有权利要求7所述重组β-半乳糖苷酶的牛奶添加剂。