[发明专利]牛鞭、驴鞭与马鞭多重PCR检测试剂盒及鉴定方法

说明书

本发明涉及中药检测技术领域，是一种牛鞭、驴鞭及马鞭多重PCR检测试剂盒，其特征是由鉴定反应、阳性对照反应和阴性对照反应三部分体系组成。总体积为100μL，含有缓冲液，dNTP，引物1、引物2和引物3，Taq DNA聚合酶，模板DNA提取液，双蒸馏水补齐至100μL。一种牛鞭、驴鞭及马鞭多重PCR检测鉴定方法是设计合成牛鞭、驴鞭及马鞭三对特异寡核苷酸引物、确定反应程序和结果判定等步骤。判断标准：琼脂糖凝胶出现扩增长度为254bp的是牛鞭，出现扩增长度为447bp的是驴鞭，出现扩增长度为595bp的是马鞭。牛鞭、驴鞭及马鞭多重PCR检测试剂盒及鉴定方法能够同时准确区别牛鞭、驴鞭及马鞭。

技术领域

本发明涉及中药检测技术领域，更具体地说，是一种牛鞭、驴鞭与马鞭DNA检测试剂盒及鉴定方法。

背景技术

鞭类药材系指动物的带睾丸的阴茎。其味甘、咸，性温，归肝、肾、膀胱经。自古以来就是中医临床常用补肾壮阳药物，认为其对性功能障碍有明显的改善和促进作用。由于其活性强，临床疗效好，越来越引起人们的重视。运用中医学“以脏补脏”的理论,结合现代药理,人们对鞭类药材进行了深入的研究和开发,对于继承和发展祖国的性文化、食疗养生文化、促进生命科学的研究具有十分重要的现实意义。但由于鞭类药材品种较多，而且加工的过程不同，在对其真伪鉴别和质量评价工作中，尚无用化学成分为指标的科学标准加以控制，也没有比较完整的质量标准体系。近年来由于鞭类药材尤其是鹿鞭的货源紧缺、价格昂贵，致使各种伪充品层出不穷。目前对该类药材的真伪及品种的鉴定主要是靠感官，或更多利用性状或显微鉴别方法，一些新技术、新方法的应用还处于初步的探索阶段，对鞭类药材的系统研究尚不多见。

近年来,以鞭类为主药的复方滋补方药日渐增多,如至宝三鞭丸、海狗丸、三肾丸等,以鞭类为主药的药粥、药膳、药酒风靡盛行,动物鞭被作为一种高档滋补品赠送亲友。

牛鞭为牛科动物雄性黄牛(Bos taurus domesticus Gmelin)的阴茎及睾丸。宰杀后，割取阴茎，除去残肉及油脂，风干或低温干燥。性甘、咸，温。具有补肾壮阳，固元益精，散寒止痛。主治肾阳虚衰、阳痿遗精、宫寒不孕、耳鸣腰酸、遗尿疝气。

驴鞭(Equus Penis et Testis)是马科动物驴的雄性外生殖器，又名驴肾，形态似驴肉条。雄驴杀死后，割取其阴茎及睾丸，剔除残肉及油脂，洗净，悬挂于通风处阴干或晒干。是一味强筋壮骨的中药，具有益肾强筋、滋肾壮阳的功效。牛鞭与驴鞭作为药用分别始载于《本草纲目》兽部第五十卷牛项下和驴项下。牛鞭与驴鞭是归身补血片、补天灵片和参茸多鞭酒主要成分，收录于中华人民共和国卫生部药品标准(牛鞭：中药成方制剂7册39页WS3-B-1304-93；驴鞭：Z7-82 WS3-B-1346-93；参茸多鞭酒：Z1-110标准编号：WS3-B-0108-89)。两种鞭类药材主要伪品为马鞭。

王远志《鞭类药材的鉴定研究》(辽宁中医学院[D]，2004)首次对鹿鞭、驴鞭以及牛鞭6类鞭类药材进行了显微鉴定、横向的蛋白质电泳分析和紫外光谱分析的对比实验，通过对不同鞭类药材的电泳谱带和紫外光谱峰形上做了对比分析。尽管鉴定鞭类药材的方法拓展到了从基源，显微到理化鉴别的层面、角度，建立了比较客观的品质评价体系。但是,这些检测技术方法很难从根本上代表鞭类药材变异的遗传标记(genetic marker)。这种状况严重制约了鞭类质量研究的进一步发展，故迄今为止还没有获得能够稳定、有效地区分牛鞭、驴鞭的特异性DNA分子标记。