[发明专利]一种DA单克隆抗体免疫亲和柱在测定软骨藻酸类毒素中的应用

权利要求书

1.一种DA单克隆抗体免疫亲和柱在测定软骨藻酸类毒素中的应用，其特征在于，具体应用方法为：

（a）样品前处理：准确称取已充分均质的贻贝组织样品、毛蚶组织样品、泥蚶组织样品、扇贝组织样品或牡蛎组织样品2.00g于50 mL具塞离心管中，加入8 mL体积浓度为75%的甲醇水溶液，涡旋振荡2min，超声提取10min，7000r/min离心5min，将上清液移至另一50mL离心管中，得一次提取液；再往剩余残渣中加入8mL 体积浓度为75%的甲醇水溶液，重复提取一次，得二次提取液；合并一次提取液和二次提取液后定容至20mL，得提取液；移取1mL提取液至另一50mL离心管中，加入5mL PBS缓冲液进行稀释，得待净化的样品液；

（b）免疫亲和柱净化：取一DA单克隆抗体免疫亲和柱，待其恢复至室温后去掉亲和柱堵头，放出柱内保存液后，上样品液；上样结束后，用6mL体积浓度50%甲醇水溶液淋洗亲和柱，挤干柱内残留液，并弃去以上全部流出液，最后用3mL含有质量浓度2%氨水的甲醇溶液洗脱，收集的洗脱液于50℃氮气吹干，用1mL初始流动相定容溶解，经滤膜过滤后供液相色谱-质谱进行分析；液相色谱条件为：色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C₁₈柱，柱规格为2.1mm×50mm，1.7µm；进样体积2μL；样品室温度10℃；柱温40℃；流速0.2mL/min；流动相A为乙腈，B为含0.1%甲酸的2mmol/L乙酸铵溶液，梯度洗脱：0~1.0min，90 %A；1.0~3.0min，90% ~10%A；3.0~4.0min，10% A；4.0 ~4.1min，10% ~90 % A；4.1 ~5.5min，90 %A；质谱条件为：电喷雾离子源，正离子扫描；检测方式：多反应监测模式；毛细管电压：3.0kV；离子源温度：150℃；脱溶剂气温度：600℃；锥孔气流量：150 L/h；脱溶剂气流量：1000L/h；锥孔电压：12V；碰撞能量：16eV；分析物定性离子对：m/z 312.2 248.2；分析物定量离子对：m/z 312.2 266.2。