[发明专利]一种膀胱癌干细胞标志物及标记方法、膀胱癌分子分型试剂盒及应用

说明书

本发明提出了一种膀胱癌干细胞标志物及标记方法、膀胱癌分子分型试剂盒及应用。本发明的标记方法是用小鼠源性OV6抗体与大鼠抗小鼠IgG、磁性微珠一起孵育，得到混合物；再将膀胱癌细胞系或膀胱癌组织细胞与上述混合物孵育；将孵育后的体系置于MACS MS柱上进行过滤分离，得到OV6阳性膀胱癌细胞，即为膀胱癌干细胞。最后检测OV6阳性膀胱癌细胞标记效率。进一步的，在OV6标记后用CD44抗体再标记膀胱癌细胞系，得到OV6阳性/CD44阳性膀胱癌细胞。经干细胞相关实验验证，本发明能够对膀胱癌干细胞进行显著标记，OV6阳性/CD44阳性膀胱癌细胞具有更高的成瘤率。本发明还建立了膀胱癌组织中OV6的检测方法，发现OV6阳性比例高的膀胱癌患者的预后更差，提示OV6应用可以指导膀胱癌的分子分型和预后评估。

技术领域

本发明涉及癌细胞标志物技术领域，特别涉及一种膀胱癌干细胞标志物及标记方法、膀胱癌分子分型试剂盒及应用。

背景技术

膀胱癌是世界上发病率和病死率最高的恶性肿瘤之一。据统计2012年全世界有429,800个新发病例，死亡人数为165,100。相对与西方发达国家，中国的膀胱癌发病率和病死率较低，然而研究数据表明中国的前膀胱癌发病率正在逐年攀升。因此膀胱癌不仅是世界范围内重要的健康问题，也成为了威胁我国国民健康的重要问题之一。

肿瘤干细胞被认为是癌症复发、转移的主要原因，癌症治疗中以肿瘤干细胞为靶标的重要性已被指出。但是肿瘤组织中肿瘤干细胞比率较低，特异性识别肿瘤干细胞并进行治疗是极其困难的。肿瘤干细胞的检测技术以及以肿瘤干细胞为靶标的新疗法的开发已成为癌症医疗中的重要课题。目前膀胱癌干细胞的标志物主要包括CD133、SOX2和醛脱氢酶1A1(ALDH1A1)等，主要用于膀胱癌干细胞的标记和分选。但是目前膀胱癌干细胞的研究存在一些问题，首先，以上膀胱癌干细胞标志物标记的膀胱癌细胞是否属于膀胱癌干细胞还存在争议；然后，这些标志物在多数膀胱癌细胞系和组织中的表达丰度存在较大差异，这些都大大影响了膀胱癌干细胞研究的深入和临床应用的探索；最后，这些标记物在膀胱癌组织中的表达水平与膀胱癌患者的预后的关系没有研究清楚，这极大地影响了膀胱癌干细胞标志物在临床精准治疗的应用。

发明内容

本发明提出一种膀胱癌干细胞标志物及标记方法、膀胱癌分子分型试剂盒及应用，增强了对膀胱癌干细胞标记的特异性，分离出的膀胱癌干细胞的干细胞特性也更强，并且结合标记试剂盒的应用，使标记和分离膀胱癌干细胞更加简洁有效。

本发明的技术方案是这样实现的：

根据本发明实施例的第一方面，提供一种膀胱癌干细胞标志物，标志物包括抗体OV6。

可选地，所述标志物还包括抗体CD44。如此，增强了对膀胱癌干细胞标记的特异性。

根据本发明实施例的第二方面，提供一种对膀胱癌干细胞进行标记的方法，包括以下步骤：

a.用小鼠源性OV6抗体与大鼠抗小鼠IgG、磁性微珠一起孵育，得到混合物；

b.将膀胱癌细胞系或膀胱癌组织细胞与上述混合物孵育；

c.将孵育后的体系置于MACS MS柱(Miltenyi Biotec，Bergisch Gladbach，德国)上进行过滤分离，得到OV6阳性膀胱癌细胞，即为膀胱癌干细胞。

在本实施例中，膀胱癌细胞系为UMUC3，是从上海中国科学院细胞所获得。UMUC3细胞在Minimum Essential Medium培养基(1871544,Gibco,Waltham,MA,USA)含10％胎牛血清(FBS，10099-141、Gibco、美国)中培养，辅以1％青霉素/链霉素(15140122，Gibco，美国)。将1×10⁶个UMUC3细胞铺板于10cm皿(430167，Coring，USA)中，培养48h，至细胞长至80～90％。