[发明专利]一种高通量单分子力谱方法

权利要求书

1.一种高通量单分子力谱方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)以DNA折纸为基底，根据该DNA折纸的几何结构在该DNA折纸上分别选取若干修饰位点，在所选修饰位点的寡核苷酸链的5’端延伸一段目标DNA短链，所述目标DNA短链可与固定于AFM探针上的DNA短链互补配对；以及

2)采用原子力显微镜单分子力谱的方法对位于DNA折纸和AFM探针上的两条互补DNA短链间的相互作用力进行测定，并收集特异性力-距曲线数据；

其中，步骤1)包括：以一条长链DNA为主链，与若干订书钉单链以及若干目标DNA短链混合进行杂交反应，实现目标DNA短链在DNA折纸上的修饰。

2.根据权利要求1所述的高通量单分子力谱方法，其特征在于，所述DNA折纸是具有任意一种形状的二维或三维纳米结构。

3.根据权利要求1所述的高通量单分子力谱方法，其特征在于，所述步骤1)具体包括：将脚手架链M13mp18 DNA与若干订书钉单链以及目标DNA短链按1：10：10的摩尔比混合后置于1xTAE/Mg²⁺缓冲液体系中，再置于PCR仪上从95℃退火至20℃，退火速度为0.1℃/10s。

4.根据权利要求1所述的高通量单分子力谱方法，其特征在于，所述步骤2)包括：将合成的带有目标DNA短链的DNA折纸溶液滴加于衬底上吸附一定时间，之后置于原子力显微镜的样品台上，于液相Peak force Tapping模式下的Spot and Shoot对DNA折纸进行成像，然后利用单点Ramp功能在目标位点做特异性力-距曲线。

5.根据权利要求4所述的高通量单分子力谱方法，其特征在于，所述带有目标DNA短链的DNA折纸溶液的浓度为1～5nM，用量为1～5μL。

6.根据权利要求1所述的高通量单分子力谱方法，其特征在于，DNA短链在AFM探针上的固定是通过修饰在该DNA短链的3’端的巯基与AFM探针上的镀金表面在室温下反应1～3h完成。

7.根据权利要求6所述的高通量单分子力谱方法，其特征在于，所述DNA短链在AFM探针上的固定所采用的DNA短链的浓度为1～10nM，用量为50～150μL。

8.根据权利要求1所述的高通量单分子力谱方法，其特征在于，所使用的原子力显微镜扫描头为J型扫描头，AFM探针为BL-TR400PB的全镀金的氮化硅探针。

9.根据权利要求4所述的高通量单分子力谱方法，其特征在于，所述步骤2)中所使用的衬底是新解离的云母片，该云母片预先被黏贴于铁片上，使用时将云母进行剥离以获得平整且干净的云母片，然后把合成的带有目标DNA短链的DNA折纸溶液滴于所述云母片上吸附2-5min，之后置于原子力显微镜样品台上进行AFM成像。