[发明专利]一种粉防已的组织培养技术

说明书

本发明公开了一种粉防已的组织培养技术，涉及粉防已通过离体快繁技术获得优质种苗的育苗方法。本发明以粉防已带芽茎段为外植体，经过外植体消毒、丛生芽诱导、生根培养、炼苗移栽等过程从而建立了粉防已组织培养快速繁殖体系，加速粉防已良种的推广和资源开发利用具有重要的现实意义。

技术领域

本发明涉及植物生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种粉防已的组织培养技术。

背景技术

粉防已为防已科植物，秋季采收，挖出根后洗净刮去栓皮，直径在2cm以上对半半劈开，晒干。气味苦，具有祛风除湿，利水消肿。用于治疗水肿，小便不利，风湿痹痛，疮毒。长期以来供不应求，加上人为的掠夺式砍伐导致粉防已野生资源枯竭，因此有必要对其资源进行保护。近年来，粉防已资源开发有了一定的规模，在江西、湖北、广东、福建等建立了GAP种植基地，对粉防已野生资源保护工作起到了一定的促进作用。目前粉防已主要通过种子进行种苗繁殖，但由于种子繁殖后代性状发生分离，不利于优质种质资源保护，制约了优质粉防已的推广种植。因此，有必要建立粉防已的组织培养技术，为其良种快速繁殖提供技术支撑和保障，也为满足我国对粉防已种苗的需求，加速其资源扩充具有重要的现实意义。对比文件1，申请号：CN201410401162，发明名称：粉防已的种子组培繁殖方法，包括种子储藏、种子消毒、启动培养、诱导培养、增殖培养、生根培养六大步骤，其特征在于，诱导培养步骤中，首先采用诱导培养基一对萌动膨大的种子进行培养，诱导出无菌苗，然后采用诱导培养基二对无菌苗进行继续培养，从而降低了丛生芽的褐化率并消除了丛生芽的部分玻璃化现象。在增殖培养步骤中采用两步增殖培养，第一步可以快速培养出大量的丛生芽，第二步可以培养出用于生根的健壮丛生芽苗以及部分新增殖的丛生芽，有效的提高本组培方法的繁殖效率。对比文件与本案的不同。

发明内容

本发明的目的在于提供出一种粉防已的组织培养技术，本发明以粉防已带芽茎段为外植体，经过外植体消毒、丛生芽诱导、生根培养、炼苗移栽等过程从而建立了粉防已组织培养快速繁殖体系，从而实现了本发明的目的。

本发明的一种粉防已的组织培养技术，包括以下的步骤：

步骤1，丛生芽诱导：选取生长健壮无病虫的幼树当年生的带芽茎段作为外植体,用洗洁精水溶液浸泡14min，然后用自来水冲洗35min，擦干表面水分后备用,在超净工作台中以70%～80%乙醇浸泡14s，0.1%升汞溶液消毒25min，再用无菌水清洗8次，擦干后切成长度为1.5cm的茎段接种到诱导培养基上,先在30℃条件下全暗培养25天，然后置于每天光照15小时，光照强度为900lx，培养温度为30℃条件下培养，直至诱导形成丛生芽；诱导培养基为：MS+6mg/L6-BA+2mg/L NAA+0.9mmol/L La(NO₃)₂+3.9%蔗糖+0.9%琼脂+0.15%活性炭，pH值为5.9;

步骤2，增殖培养：将步骤1所得的丛生芽转入增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在30℃条件下全暗培养直至叶腋处萌生一个侧芽，然后置于每天光照16小时，光照强度为900lx，培养温度为30℃的条件下培养直至各丛生芽伸长到5cm；增殖培养基为：MS+3mg/L6-BA+0.9mg/L NAA+3.9%蔗糖+0.8%琼脂+0.2%活性炭，pH值为5.9;

步骤3，生根培养：将步骤1或步骤2所获得的高度约为5cm的丛生芽芽切割并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在30℃条件下全暗培养10天，然后置于每天光照15小时，光照强度为1900lx，培养温度为30℃的条件下培养至生根；生根培养基为：1/2MS+4mg/LNAA+3.9%蔗糖+0.9%琼脂+0.2%活性炭，pH值为5.9;

步骤4，炼苗移栽：粉防已瓶内生根33天后，置于自然光照下炼苗8天后，洗净根部培养基，移栽由黄心土：河沙＝3：2混合成的基质中。