[发明专利]一种大熊猫粪便代谢组的分析方法有效
| 申请号： | 201811403389.9 | 申请日： | 2018-11-22 |
| 公开（公告）号： | CN109374773B | 公开（公告）日： | 2020-05-22 |
| 发明（设计）人： | 张华;韩顶立;尹彦强;杨洋;菲利普贝克 | 申请（专利权）人： | 重庆医科大学 |
| 主分类号： | G01N30/02 | 分类号： | G01N30/02;G01N30/34;G01N30/72 |
| 代理公司： | 重庆中流知识产权代理事务所(普通合伙) 50214 | 代理人： | 陈立荣 |
| 地址： | 400000*** | 国省代码： | 重庆;50 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 大熊猫 粪便 代谢 分析 方法 | ||
1.一种大熊猫粪便代谢组的分析方法，其特征在于，包括以下步骤：取大熊猫粪便样品与萃取溶剂-内标混合液混合，得到混合样本；并研磨所述混合样本，初次离心取上清液样品，浓缩干燥得到粉末样品；将所述粉末样品、氢氧化钠、甲醇和吡啶溶液混合溶解，得到衍生化初样；将氯甲酸甲酯分两次加入所述衍生化初样中，并涡旋25-35s混合，加入氯仿和碳酸氢钠溶液涡旋8-15s混合，得到衍生化样本；离心所述衍生化样本并取下层氯仿层样品进行气相色谱-质谱分析；
所述气相色谱-质谱分析的毛细管柱是ZB-1701；分析中电子碰撞电离能为65-75eV；
在290℃时，氦气流的流速为0.8-1 .2mL/min；辅助、质谱四极和质谱源的温度为240-255℃、225-235℃和145-155℃；扫描速度为1.562μ/s；溶剂延迟时间为5-6.5min；
将200μL的氢氧化钠、167μL甲醇和34μL的吡啶溶液与粉末样品混合溶解；
所述粉末样品为10mg大熊猫粪便样品经过浓缩干燥得到的粉末样品；
所述萃取溶剂-内标混合液为甲醇80％，异丙醇:乙腈:水的体积比为3:2:2、甲醇100％、甲醇:氯仿体积比为3:1、乙腈100％或乙腈:氯仿体积比为3:1中的一种，所述萃取溶剂-内标混合液中的内参物为d4-丙氨酸。
2.根据权利要求1所述的大熊猫粪便代谢组的分析方法，其特征在于，研磨所述混合样本的频率为30Hz，时间为150-200s，且在所述研磨前加入研磨珠，所述初次离心的速度为15000g-18000g，时间为12-18min。
3.根据权利要求1所述的大熊猫粪便代谢组的分析方法，其特征在于，浓缩干燥得到所述粉末样品采用真空浓缩干燥，浓缩干燥时间为150-200min。
4.根据权利要求1所述的大熊猫粪便代谢组的分析方法，其特征在于，离心所述衍生化样本的速度为1400rpm-1700rpm，时间为250-320s，温度为4℃。
5.根据权利要求1所述的大熊猫粪便代谢组的分析方法，其特征在于，所述氯仿和所述碳酸氢钠溶液按照1:1的体积比加入。
6.根据权利要求1所述的大熊猫粪便代谢组的分析方法，其特征在于，所述碳酸氢钠溶液的浓度为40-55mmol/L。
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