[发明专利]一种羊痘、山羊传染性胸膜肺炎二联灭活疫苗及其生产方法

说明书

本发明涉及一种羊痘、山羊传染性胸膜肺炎二联灭活疫苗及其制备方法。本发明采用山羊痘病毒AV41株和山羊支原体山羊肺炎亚种C87001株分别接种悬浮培养的BHK‑21细胞和适宜培养基培养，收获培养物，经浓缩、纯化，分别用BEI和硫柳汞灭活后，按一定比例加入适宜佐剂混合乳化制成。用于预防山羊痘和山羊传染性胸膜肺炎。本发明系国际上首次获得羊痘和山羊传染性胸膜肺炎的二联灭活疫苗，可实现一针两防的目的，同时，采用本发明提出的悬浮培养BHK‑21细胞生产羊痘灭活疫苗，较原绵羊睾丸细胞制备的活疫苗具有明显的优势，可解决目前羊痘活疫苗生产过程中面临的绵羊睾丸来源困难、易引起羔羊死亡、母羊流产，以及疫苗需皮内免疫，在临床使用过程中难以操作等问题。

技术领域

本发明涉及一种羊痘、山羊传染性胸膜肺炎二联灭活疫苗及其生产方法。属于兽用生物制品领域。

背景技术

养羊业与国民经济的发展和各族人民生活水平的提高关系十分密切，特别是进入21世纪后，我国养羊业得到快速发展，成果显著，养羊业在国民经济中的比重也逐年提高。根据联合国粮农组织(FAO)数据，2013年，中国大陆地区的山羊养殖量即达1.83亿头。2014年，中国大陆地区的山羊养殖量为1.88亿头。虽然我国养羊数量位居世界首位，但与养羊业发达的国家相比，疫病防控水平较薄弱，这在一定程度上制约了我国养羊业的发展。

羊痘是世界动物卫生组织(OIE)规定的必须报告的传染病之一，羊痘病毒(Capripox viruses)属于痘病毒科山羊痘病毒属。羊痘是由绵羊痘和山羊痘引起的一种接触性传染病，呈流行性。它的特征是在全身皮肤、粘膜上出现典型的痘疹，病羊发热并有较高的死亡率，其中羔羊的发病致死率可高达100％，妊娠母羊常发生流产。本病主要通过呼吸道感染，在冬末春初流行，大多数绵羊山羊生产国均有流行。非洲、亚洲大部分国家报道该病的发生。这些疫病一旦发生，病情迅猛，传播性强，死亡率高，损失极大，国际上始终都对这类烈性疫病高度重视，严加防范。我国近3年的羊痘疫情时有发生，给我国养羊业造成重大损失。

山羊传染性胸膜肺炎(Contagious caprine pleurpneumonia,CCPP)是由山羊支原体山羊肺炎亚种(M.capricolum subsp.capripneumoniae,Mccp，引起的一种山羊特有的急性或慢性高度接触性传染病，以呈现纤维素性肺炎和胸膜炎为特征,发病率为22％～30％，个别地区高达60％～80％，死亡率15％～30％。该病在非洲、亚洲等数十个国家和地区都有流行，对山羊养殖业带来了较为严重的损失，被世界动物卫生组织列为B类传染病。我国于1947年首发于甘肃,继而在内蒙古、四川、山东、湖北、河北、云南、江西、江苏等地陆续发现。近几年，在湖南、河南、贵州、重庆、内蒙等地区都有CCPP的报道，给山羊养殖业造成了较大的经济损失。

目前，我国羊群中羊痘和山羊传染性胸膜肺炎感染的状况仍非常普遍，疫苗免疫是我国防控羊痘和山羊传染性胸膜肺炎的主要手段。其中，目前我国广泛应用的山羊痘活疫苗，经过长期的临床实践检验，发现还存在如下3项主要不足，一是生产种毒存在一定的残余毒力，易引起羔羊死亡、母羊流产，存在较大的安全隐患；二是需采用原代绵羊睾丸细胞制备疫苗，生产过程中面临绵羊睾丸来源困难的问题，且存在原代细胞携带外源病毒的生物安全风险；三是需皮内免疫，在临床使用过程中难以操作。

本发明提出的羊痘、山羊传染性胸膜肺炎二联灭活疫苗，采用山羊痘病毒AV41株和山羊支原体山羊肺炎亚种C87001株分别接种悬浮培养的BHK-21细胞和适宜培养基培养，收获培养物，经浓缩、纯化，分别用BEI和硫柳汞灭活后，按一定比例加入适宜佐剂混合乳化制成。用于预防山羊痘和山羊传染性胸膜肺炎。本发明系国际上首次获得羊痘和山羊传染性胸膜肺炎的二联灭活疫苗，可实现一针两防的目的，同时，采用本发明提出的悬浮培养BHK-21细胞生产羊痘灭活疫苗，较原绵羊睾丸细胞制备的活疫苗具有明显的优势，可解决目前羊痘活疫苗生产过程中面临的绵羊睾丸来源困难、易引起羔羊死亡、母羊流产，以及疫苗需皮内免疫，在临床使用过程中难以操作等问题。

发明内容