[发明专利]附子指纹图谱、其建立方法及附子质量检测方法

权利要求书

1.一种附子指纹图谱方法的建立方法，其特征在于，主要包括以下步骤：

制备对照品溶液：采用48vol%-52vol%甲醇水溶液溶解苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱制得对照品溶液，使每1ml所述对照品溶液中含甲酰新乌头原碱8µg-12µg、苯甲酰乌头原碱8µg -12µg以及苯甲酰次乌头原碱8µg-12µg；

制备附子供试品溶液；取附子粉末，加入35vol%-50vol%乙醇水溶液，密塞，超声处理30-40min，过滤，减压回收滤液中溶剂至干，再采用35vol%-50vol%甲醇水溶液溶解定容至4ml-6ml；所述附子粉末与所述乙醇水溶液的比例为0.03g/ml-0.05g/ml；

用高效液相色谱法测定所述附子供试品溶液和所述对照品溶液，色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以pH为9.5-10.4的0.14wt%-0.17wt%的乙酸铵溶液为流动相B，分别对所述对照品溶液和所述供试品溶液进行梯度洗脱，并且在所述梯度洗脱的过程中控制所述甲醇的体积，使得所述流动相A的体积占流动相总体积的百分比由5%-8%增加至60%-65%，所述流动相B的体积占流动相总体积的百分比由92%-95%降低至35%-40%；

所述流动相B为0.15wt%的乙酸铵溶液，所述流动相B的pH为10.0；

在所述梯度洗脱步骤中：

t=0min-7min时，所述流动相A的体积占流动相总体积的百分比为5%-8%，所述流动相B的体积占流动相总体积的百分比为92%-95%；

t=7min-20min时，所述流动相A的体积占流动相总体积的百分比为5%-8%→24%-28%，所述流动相B的体积占流动相总体积的百分比为92%-95%→72%-76%；

t=20min-50min时，所述流动相A的体积占流动相总体积的百分比为24%-28%→60%-65%，所述流动相B的体积占流动相总体积的百分比为72%-76%→35%-40%。

2.根据权利要求1所述的附子指纹图谱方法的建立方法，其特征在于，制备所述附子供试品溶液的步骤中，所述乙醇水溶液的体积分数为50%；甲醇水溶液的体积分数为50%；所述附子粉末与所述的乙醇水溶液比例为0.04g/ml。

3.根据权利要求1所述的附子指纹图谱方法的建立方法，其特征在于，在所述梯度洗脱步骤中：

t=0min-7min时，所述流动相A的体积占流动相总体积的百分比为5%，所述流动相B的体积占流动相总体积的百分比为95%；

t=7min-20min时，所述流动相A的体积占流动相总体积的百分比为5%→25%，所述流动相B的体积占流动相总体积的百分比为95%→75%；

t=20min-50min时，所述流动相A的体积占流动相总体积的百分比为25%→60%，所述流动相B的体积占流动相总体积的百分比为75%→40%。

4.根据权利要求1所述的附子指纹图谱方法的建立方法，其特征在于，在所述梯度洗脱的过程中控制流速为0.8ml/min-1.2ml/min，柱温为30℃-35℃，检测波长为230nm-240nm。

5.根据权利要求1所述的附子指纹图谱方法的建立方法，其特征在于，色谱柱的型号是EXCEL SUPERC18，参数是4.6mm×250mm，5μm。

6.一种附子质量检测方法，其特征在于，包括将待检测的附子的高效液相色谱图谱与权利要求1-5任一项所述的附子指纹图谱方法的建立方法构建而成的附子指纹图谱进行比较。

7.根据权利要求6所述的附子质量检测方法，其特征在于，所述待检测的附子的高效液相色谱图谱与所述附子指纹图谱相似度不低于0.80。