[发明专利]基本上无动物蛋白的重组体弗林蛋白酶及其生产方法在审
| 申请号： | 201811405688.6 | 申请日： | 2008-12-19 |
| 公开（公告）号： | CN110066782A | 公开（公告）日： | 2019-07-30 |
| 发明（设计）人： | 巴巴拉·普莱莫尔;西蒙·冯菲尔克斯;利奥波德·格里尔博格;梅因哈德·哈希拉彻;罗兰·盖伊尔;阿图尔·米特雷尔;曼弗雷德·赖特尔 | 申请（专利权）人： | 百深有限责任公司;百深公司 |
| 主分类号： | C12N9/64 | 分类号： | C12N9/64 |
| 代理公司： | 中原信达知识产权代理有限责任公司 11219 | 代理人： | 杨青;穆德骏 |
| 地址： | 瑞士*** | 国省代码： | 瑞士;CH |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 动物蛋白 弗林蛋白酶 重组体 生产 | ||
1.一种包含基本上无动物蛋白的重组体弗林蛋白酶的组合物。
2.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，包含活性至少是大约10000U弗林蛋白酶/mL的重组体弗林蛋白酶和浓度小于大约11μg蛋白/mL的CHO寄主细胞蛋白。
3.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，包含活性至少是大约10000U弗林蛋白酶/mL的重组体弗林蛋白酶和浓度小于大约1.0ng蛋白/U弗林蛋白酶活性的CHO寄主细胞蛋白。
4.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，包含活性至少是大约10000U弗林蛋白酶/mL的重组体弗林蛋白酶和浓度小于大约14ngDNA/mL的CHO寄主细胞DNA。
5.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，包含活性至少是大约10000U弗林蛋白酶/mL的重组体弗林蛋白酶和浓度小于大约0.5pgDNA/U弗林蛋白酶活性的CHO寄主细胞DNA。
6.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，包含活性至少是大约100U/μg的重组体弗林蛋白酶和浓度小于大约11μg蛋白/mL的CHO寄主细胞蛋白。
7.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，包含活性至少是大约100U/μg的重组体弗林蛋白酶和浓度小于大约1.0ng蛋白/U弗林蛋白酶活性的CHO寄主细胞蛋白。
8.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，包含活性至少是大约100U/μg的重组体弗林蛋白酶和浓度小于大约14ng DNA/mL的CHO寄主细胞DNA。
9.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，包含活性至少是大约100U/μg的重组体弗林蛋白酶和浓度小于大约0.5pg DNA/U弗林蛋白酶活性的CHO寄主细胞DNA。
10.一种制造基本上无动物蛋白的重组体弗林蛋白酶的方法，包括以下步骤：在无血清培养基中在允许弗林蛋白酶分泌进入培养基的条件下，培养用编码弗林蛋白酶的多核苷酸转化的或者转染的寄主细胞。
11.如权利要求10所述的方法，其特征在于，包括下述步骤：使寄主细胞适应在血清浓度逐渐降低、直至血清从培养基中被除去的培养基中生长。
12.如权利要求10所述的方法，其特征在于，包括使寄主细胞由在含有血清的培养基中生长转移至在无血清的培养基中生长。
13.如权利要求11或者12所述的方法，其特征在于，所述寄主细胞是CHO细胞。
14.一种应用如权利要求1所述组合物的方法，包括下述步骤：在可将前肽从前蛋白中切除从而形成成熟蛋白的条件下使前蛋白与所述组合物相接触。
15.如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述成熟蛋白是冯威勒布兰特因子。
16.如权利要求14所述的方法，其特征在于，所述成熟蛋白是因子VIII。
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