[发明专利]一种快速收集烟草挥发性气味物质的方法及应用

说明书

本发明涉及生物技术领域，特别是指一种快速收集烟草挥发性气味物质的方法及应用。包括以下几个步骤：用蒸馏水清洗烟草植株，用气味收集袋将烟草植株罩住，把气味收集箱出气口连入气味收集袋；将已活化的吸附管一端插入气味收集袋内，另一端连接气味收集箱抽气口，连续吸附一定时间后，将挥发性气味物质从吸附管上洗脱下来并进行浓缩；随后用气相色谱‑质谱联用仪（GC‑MS）鉴定收集到的烟草挥发性物质是否纯净，用产卵选择试验鉴定收集到的烟草挥发性气味物质是否为烟夜蛾产卵引诱活性物质或产卵趋避活性物质。本发明可以快速、高效地收集纯净的活性植物气味物质，并可利用收集到的活性植物气味植物研发害虫绿色防控引诱剂。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是指一种快速收集烟草挥发性气味物质的方法及应用。

背景技术

植物挥发性气味物质在植食性害虫取食、产卵等生命活动中发挥着不可替代的重要作用。因此研究植物挥发性气味物质中对害虫取食或产卵等具有显著引诱或趋避活性的气味物质，对于新型害虫引诱剂的开发以及害虫的绿色综合防控具有非常重要的意义。烟夜蛾作为烟草、辣椒等作物上的重要害虫，其成虫偏好在烟草植株上产卵，因此探索一种能够有效收集烟草挥发性气味物质的方法对于烟夜蛾引诱剂的研发以及绿色防控策略的制定具有十分重要的意义。

以前利用顶空法收集烟草挥发性气味物质，先用酒精或其他有机溶剂浸泡硅胶管，去除杂质。浸泡后的硅胶管晾干，用来连接大气采样仪、活性炭洗瓶、蒸馏水洗瓶、玻璃缸和吸附管，收集12 h后洗脱吸附管，浓缩后进行烟草挥发性气味物质的鉴定。虽然硅胶管用有机溶剂浸泡以去除杂质，但是由于本身材质原因，依然会有大量杂质残留。而且，使用硅胶管的连接处较多，不易保证其密封性，收集过程中会有大量空气杂质进入吸附管，致使最终检测得到的挥发性物含量少且含有大量杂质。周拥军等2012年发表了一种利用顶空固相微萃取法收集山核桃挥发性风味物质的方法（中国粮油学报，2012.27（6），115-119）。但这种方法存在固相微萃取的萃取头造价昂贵，且不同类型萃取头的使用范围较窄，若不能选择合适的萃取头，无法得到准确的植物挥发性物质。

发明内容

本发明提出一种快速收集烟草挥发性气味物质的方法及应用，解决了现有技术中植物挥发性气味物质无法准确得到的问题。

本发明的技术方案是这样实现的：

一种收集烟草挥发性气味物质的高效方法，包括如下步骤：

（1）在收集烟草挥发性气味物质2-3 h前，用蒸馏水将田间或实验室栽培的烟草植株清洗3-5次，保证每个叶片、花和茎上均无杂物；

（2）将Tenax TA吸附管（100mg，6×150mm）用活化仪在250°C 下持续活化15-30min；

（3）用气味收集袋（宽25-48cm，长35-60cm）将烟草植株整株罩上，把气味收集箱（PYE Volatile Collection Kit）的出气管插入收集袋底部10-20 cm，然后用棉线和脱脂棉将烟草根部茎连同气味收集袋底部扎紧；

（4）将气味收集袋上部剪一孔径大小为8-10 mm的小孔，把吸附管一端从小孔插入收集袋内，用脱脂棉线缠绕几圈后将该口扎紧；

（5）把吸附管另一端连入气味收集箱抽气管，并在接口处用封口膜密封，打开气味收集箱电源，调节气流为500-800 mL/min，连续收集12-14 h；

（6）共用1-2 mL色谱纯重蒸正己烷将吸附管上的烟草气味物质洗脱至棕色样品瓶，洗脱过程应多次少量连续洗脱3-5次，之后用氮吹法将样品浓缩至50-100 uL，存放在-20 ℃冰箱中待用。

所述的烟草挥发性气味物质的应用，烟草挥发性气味物质作为引诱或趋避烟夜蛾产卵的活性物质或研发害虫绿色防控引诱剂的应用。

本发明的有益效果在于：