[发明专利]一种异鼠李素-3-O-新橙皮苷制备液相色谱分离方法

说明书

本发明公开了一种包括醇提浓缩、大孔树脂柱层析、制备液相色谱纯化的异鼠李素‑3‑O‑新橙皮苷制备液相色谱分离方法，经HPLC检测纯度大于99.0％，运用本发明的方法从蒲黄中分离得到异鼠李素‑3‑O‑新橙皮苷单体，其纯度可高达99.0％，该分离方法样品处理量大，重复性好，产品纯度高，适合于实验室以及工业化规模生产，该方法可控，可以连续规模化生产，并且克服了传统方法正相硅胶色谱柱和溶剂萃取的操作繁琐、分离周期长、环境污染严重的缺点，减少了易挥发溶剂的使用，对环境更加友好。

技术领域

本发明属于植物药有效成分提取技术领域，具体涉及一种异鼠李素-3-O-新橙皮苷制备液相色谱分离方法。

背景技术

香蒲属植物长于池沼、水边或浅沼泽中，世界共有18种，我国约有10种，资源极其丰富。蒲黄，别名蒲棒花粉、蒲草黄系香蒲科(Typhaceae)植物水烛香蒲(TyphaangustifoliaL.)、东方香蒲(Typha orientalis Presl.)或同属植物的干燥花粉，具有止血、化胶、通淋的功能，用于吐血、崩漏、外伤出血，经闭痛经，血淋涩痛。蒲黄主要含有凶类、黄酬类、长链脂肪侄类化合物、酸性成分、氨基酸、无机成分等。其中黄酬类成分具有改善微循环、降低心脑组织耗氧量、扩张血管、促凝血、抗炎、降低血脂及抗动脉粥样硬化等作用。

2015版中国药典中明确规定异鼠李素-3-O-新橙皮苷为蒲黄的特征成分，为此，实际工作中需要高纯度的异鼠李素-3-O-新橙皮苷单体作为对照品使用，特别是在含有蒲黄的药物制剂开发过程当中，如何快速、简捷的得到高纯度的异鼠李素-3-O-新橙皮苷单体是制剂工艺研发中的关键环节之一。目前主要提取分离方法大多数采用溶剂萃取、正相硅胶柱色谱等分离手段，工艺路线繁琐，收率较低，生产过程中试剂消耗大，难以工业化生产，最终产品的纯度不高，使得异鼠李素-3-O-新橙皮苷作为质量控制用对照品难以满足市场需求。

发明内容

本发明解决了现有技术的不足，提供一种包括醇提浓缩、大孔树脂柱层析、制备液相色谱纯化的异鼠李素-3-O-新橙皮苷制备液相色谱分离方法，经HPLC检测纯度大于99.0％，该方法可以连续规模化生产，并且克服了传统方法正相硅胶色谱柱和溶剂萃取的操作繁琐、分离周期长、环境污染严重的缺点，减少了易挥发溶剂的使用，对环境更加友好，效率更高。

本发明所采用的技术方案是：一种异鼠李素-3-O-新橙皮苷制备液相色谱分离方法，该方法包括以下步骤：

步骤一：醇提浓缩

以蒲黄为原料，经醇提浓缩得到蒲黄提取液；

步骤二：大孔树脂柱层析

将步骤一所述蒲黄提取液加入大孔树脂柱中层析，经洗脱后得到异鼠李素-3-O-新橙皮苷粗品；

步骤三：制备液相色谱纯化

将步骤二所述异鼠李素-3-O-新橙皮苷粗品通过制备液相色谱仪进行纯化，即采用反相C18色谱柱经流动相等度洗脱，再经后处理得到异鼠李素-3-O-新橙皮苷精品；

步骤四：

将步骤三所述异鼠李素-3-O-新橙皮苷精品经甲醇溶解、过滤、减压蒸干，溶剂重结晶，最后经过滤、烘干得到高纯度异鼠李素-3-O-新橙皮苷单体。

优选的，在步骤一中，将干燥的蒲黄粉碎后与醇溶液混合提取，其中蒲黄与醇溶液的固液比为1：4～1：8，待提取完全后将提取液采用离心机进行离心处理，然后将离心后的溶液在45～60℃下进行真空旋转蒸发除醇，得到蒲黄提取液。

更优选的，所述醇溶液为甲醇水溶液或乙醇水溶液中的一种或两种，且所述醇溶液为体积百分浓度为60％～100％的醇水体系。