[发明专利]一种MSI检测方法

权利要求书

1.一种MSI检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、分别提取同一患者的正常粘膜组织的DNA与肿瘤组织的DNA，并分别选取贝斯塔遗传标记：Bat26，Bat25，D5S346，D2S123和D17S250这5个位点进行扩增引物标记荧光；

S2、分别对步骤S1中得到的同一患者的正常粘膜组织的DNA与肿瘤组织的DNA进行PCR扩增：

S2.1、取离心管，加入12μl的DNA和0.5μl的DNA Polymerase震荡混匀，离心；

S2.2、在装有PCR预混液的8联管中的前5个孔中分别加入2μl步骤S2.1中离心后的混合液；

S2.3、盖紧管盖，震荡混匀，离心，进行PCR扩增；扩增条件为：

1)95℃,3min；

2)95℃,30秒，52℃,30秒，72℃,60秒；35个循环；

3)72℃,10min；

S3、分别对步骤S2中得到的同一患者的正常粘膜组织的DNA与肿瘤组织的DNA的PCR扩增产物在基因分析仪上按照如下过程进行毛细管电泳：

分别步骤S2.3中得到的8联管的前五个孔中的PCR扩增产物各Iμl加入到新的离心管中，然后向所述新的离心管中加入0.5ul LIZ500和10ul HIDI，震荡混匀，离心，在基因分析仪上进行毛细管电泳，得到检测结果。

2.根据权利要求1所述的MSI检测方法，其特征在于，所述扩增引物的序列如下：

针对Bat25的扩增引物为：

BAT-25F:FAM-ATGGAGGATGACGAGTTG；

BAT-25R:CAGGCTTGTACTTTACAGC；

针对Bat26的扩增引物为：

BAT-26F:HEX-ATTGGATATTGCAGCAGTCA；

BAT-26R:GCTCCTTTATAAGCTTCTTCAG；

针对D2S123的扩增引物为：

D2S123F:FAM-AAACAGGATGCCTGCCTTTA；

D2S123R:CTGACTTGGATACCATCTATCT；

针对D17S250的扩增引物为：

D17S250F:HEX-CAGGCTGGTCTCAAACTC；

D17S250R:GGAAGAATCAAATAGACAAT；

针对D5S346的扩增引物为：

D5S346F:TMR-TGGTTTCCATTGTAGCATCTTGAC；

D5S346R:CTGGTTGTTTCCGTAGTATATG。