[发明专利]诱导脐带间充质干细胞成脂分化的培养方法,以及该方法所用的培养基在审
申请号: | 201811410285.0 | 申请日: | 2018-11-23 |
公开(公告)号: | CN109355253A | 公开(公告)日: | 2019-02-19 |
发明(设计)人: | 刘年 | 申请(专利权)人: | 北京太东生物科技有限公司 |
主分类号: | C12N5/077 | 分类号: | C12N5/077 |
代理公司: | 北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙) 11371 | 代理人: | 李青 |
地址: | 100000 北京市丰*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 诱导 脐带间充质干细胞 培养基 脂滴 分化 基础培养基 抗坏血酸酯 地塞米松 细胞诱导 逐渐变大 吲哚美辛 胰岛素 脂细胞 染色 油滴 细胞 优化 配合 | ||
1.一种诱导脐带间充质干细胞成脂分化的培养基,其特征在于,其由基础培养基中至少额外添加如下组分得到:
地塞米松0.7~1.3μmol/L、吲哚美辛400~600μmol/L、IBMX0.3~0.7mmol/L、胰岛素7~13μmol/L以及抗坏血酸酯40~60μg/mL。
2.根据权利要求1所述的培养基,其特征在于,其由基础培养基中至少额外添加如下组分得到:
地塞米松0.8~1.2μmol/L、吲哚美辛450~550μmol/L、IBMX0.4~0.6mmol/L、胰岛素8~12μmol/L以及抗坏血酸酯45~55μg/mL。
3.根据权利要求1所述的培养基,其特征在于,其由基础培养基中至少额外添加如下组分得到:
地塞米松1μmol/L、吲哚美辛500μmol/L、IBMX0.5mmol/L、胰岛素10μmol/L以及抗坏血酸酯50μg/mL。
4.根据权利要求1~3任一项所述的培养基,其特征在于,所述基础培养基为DMEM低糖培养基;
优选的,所述DMEM低糖培养基中含有8%~12%FBS以及0.08%~0.12%的谷氨酰胺。
5.一种诱导脐带间充质干细胞成脂分化方法,其特征在于,包括:
使用权利要求1~4任一项所述的培养基培养脐带间充质干细胞。
6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,用于接种的脐带间充质干细胞为P3~P5代,细胞汇合度为70%~80%且状态良好的细胞经消化后收集得到。
7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,所述消化所采用的胰酶浓度为0.20%~0.30%。
8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,在消化完成,清洗细胞后,将细胞移至透气尖底细胞培养管中,离心后去除上层液体。
9.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,在培养时,细胞的接种量为每2mL培养基接种(1~5)×104个细胞。
10.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,所述培养的时间为12~14天;优选的,每2~4天换液一次。
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