[发明专利]葡萄霜霉病菌对甲氧基丙烯酸酯（QoI）类杀菌剂抗药性的Taqman-MGB检测方法在审
| 申请号： | 201811413584.X | 申请日： | 2018-11-26 |
| 公开（公告）号： | CN109706258A | 公开（公告）日： | 2019-05-03 |
| 发明（设计）人： | 周连柱;孔繁芳;黄晓庆;张昊;王喜娜;王忠跃 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院植物保护研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 100193 北京市海淀区圆*** | 国省代码： | 北京;11 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 对甲氧基 葡萄霜霉病菌 丙烯酸酯类 检测 霜霉病菌 甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂 药剂产生抗药性 杀菌剂抗药性 核苷酸突变 有效地控制 细胞色素b 丙烯酸酯 分子诊断 抗性监测 探针序列 特异引物 突变位点 细胞基因 药剂抗性 早期预警 重要意义 荧光PCR 抗药性 高通量 灵敏度 杀菌剂 抗性 菌株 探针 引物 田间 监测 应用 | ||
1.一种用于检测葡萄霜霉病菌对甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂抗药性的Taqman探针，其特征在于：包含一对扩增其细胞色素b细胞基因的第143位核苷酸突变位点的特异性引物CytbF/CytbR和一对Taqman MGB探针CytbpR/CytbpS，其序列分别为：
CytbF：5’-CCAATTAATGGGATAGCCGAAA-3’
CytbR：5’-TTTAATGATGGCGACTGCATTT-3’
CytbpR：5’-FAM-TTTGTAATAACTGTTGCAGCC-MGB-3’
CytbpS：5’-VIC-TAATAACTGTTGCACCCC-MGB-3’
2.使用葡萄霜霉病菌对甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂抗药性的Taqman-MGB检测方法对葡萄霜霉病病原菌的抗药性进行快速检测，其步骤包括：
1)抽提被测菌的DNA，制备DNA样品；
2)用权利要求1中的所示的引物和探针对步骤1)中的DNA样品进行PCR扩增。
3)根据步骤2)得到的扩增曲线，判断该病菌对羧酸酰胺类杀菌剂的敏感性：若该菌株的DNA与抗性探针(CytbpR)结合，则该菌株为抗性菌株；若与敏感探针(CytbpS)结合，则为敏感菌株。
3.根据权利要求2所述的葡萄霜霉菌对甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂抗药性的特异性检测方法，其中的PCR步骤包括：
1)扩增反应体系：在20μl反应液中，包含1μL模板DNA，0.4μL CytbF，0.4μL CytbR，10μLProbe qPCR Mix，2μL CytbpR，2μL CytbpS，0.2μL RoX Reference Dye II，4μL ddH2O。
2)PCR扩增程序为：60℃，1min；95℃，10min；95℃，15s，60℃，1min，40个循环，最后60℃，1min。
4.权利要求1所述引物和探针对在葡萄霜霉病菌对甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂抗性检测中的应用。
5.权利要求2和3所述方法在葡萄霜霉病菌对甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂抗性检测中的应用。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中国农业科学院植物保护研究所，未经中国农业科学院植物保护研究所许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201811413584.X/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 上一篇：一种快速检测奶牛子宫内膜炎中病原菌的方法
- 下一篇：引物组及其应用
