[发明专利]一种基于肿瘤芯片的新生血管形成及药物评价方法

权利要求书

1.一种肿瘤芯片，其特征在于：该芯片由上下两层PDMS粘合封接而成，包括血管内皮细胞入口池(1)，细胞外基质入口池(2)，肿瘤细胞入口池(3)，1#废液池(4)，2#废液池(5)肿瘤细胞培养室(6)，血管内皮细胞培养室(7)，基质室(8)；

所述肿瘤细胞培养室(6)上连肿瘤细胞入口池(3)，下连1#废液池(4)；

所述血管内皮细胞培养室(7)上连血管内皮细胞入口池(1)，下连2#废液池(5)；

所述基质室(8)连接细胞外基质入口池(2)，中间部分为“丰”字形，中间的横向结构为对称排列着7～10个栅栏结构，基质室(8)通过两边的栅栏结构与两侧的肿瘤细胞培养室(6)和血管内皮细胞培养室(7)连接；

该芯片通过分别在肿瘤细胞培养室和血管内皮细胞培养室中培养肿瘤细胞及血管内皮细胞，构建肿瘤的免疫微环境，实现在肿瘤细胞共培养条件下的血管内皮细胞行为监测。

2.按照权利要求1所述的肿瘤芯片，其特征在于：所述微流控芯片是由高度不同的两部分组成，细胞培养室高度为200-1000μm，基质入口池和基质室高度为50-300μm。

3.一种基于肿瘤芯片的新生血管形成及药物评价方法，其特征在于采用权利要求1所述芯片，按照如下步骤进行：

(1)芯片基质灌注

采用matrigel工作液，用移液器将其加入基质入口池，每孔0.5-10μl；加适量PBS缓冲液于培养皿中，将固定芯片的培养皿放入培养箱中孵育10-60min凝胶，凝胶过程结束后，从肿瘤细胞入口池和血管内皮细胞入口池分别加入两种细胞的培养液；

(2)芯片细胞接种及培养

肿瘤细胞制成悬液，取10-100μl悬液加入入口池，移入37℃培养箱中放置，过夜；取10-100μl血管内皮细胞悬液加入入口池，芯片侧立90度，竖立方向为肿瘤细胞培养室朝下，而血管内皮细胞培养室朝上；竖立放置1-6h后，取出观察，血管内皮细胞紧贴在细胞培养室与基质室的交汇处形成薄层细胞层，形成统一的细胞运动起始位置；拍照记录细胞位置，将芯片放平移入37℃培养箱中培养、每隔24h换液一次，并定时拍照；

(3)在肿瘤细胞培养室中加入一定浓度的化合物或刺激因子，定时拍照记录肿瘤细胞形态及血管内皮细胞在基质室中的位置，实时记录细胞运动位置及形态改变。

4.按照权利要求3所述的一种基于肿瘤芯片的新生血管形成及药物评价方法，其特征在于：所述化合物为：huAA98抗体，所述化合物的浓度为：100μg/mL。

5.按照权利要求3所述的一种基于肿瘤芯片的新生血管形成及药物评价方法，其特征在于：所述血管内皮细胞在细胞接种时通过芯片侧立，使其粘附于基质表面，形成统一的细胞运动起始位置。