[发明专利]一种鼠李糖乳杆菌低盐培养基及培养方法

权利要求书

1.一种鼠李糖乳杆菌低盐培养基，其特征在于，包括低盐基础培养基和低盐优化培养基；

所述的低盐基础培养基的配方为：酵母蛋白胨15～25g/L、酵母粉5～15g/L、葡萄糖32～35g/L、乳糖5～15g/L、低聚异麦芽糖3～5g/L、L-苹果酸3～7g/L、硫酸锰0.03～0.07g/L，余量为纯化水，pH值6.5～7.0；

所述的低盐优化培养基的配方为：酵母蛋白胨15～25g/L、酵母粉10～25g/L、葡萄糖32～35g/L、乳糖5～15g/L、低聚异麦芽糖3～5g/L、L-苹果酸3～7g/L、柠檬酸3～7g/L、硫酸锰0.03～0.07g/L，余量为纯化水，pH值6.5～7.0。

2.一种鼠李糖乳杆菌低盐培养方法，其特征在于，采用如权要求1所述的鼠李糖乳杆菌低盐培养基进行培养，包括如下步骤：

1）制备发酵用的菌种

1.1）划线培养：鼠李糖乳杆菌菌粉用无菌水稀释后，于低盐基础培养基上分区划线，35～37℃厌氧培养50～60小时；

1.2）一级纯化培养：挑取低盐基础培养基平皿上的单菌落，接种至5mL低盐基础培养基的试管中，密封，35～37℃培养箱恒温静置厌氧培养15～20小时，得一级纯化菌悬液；

1.3）二级纯化培养：按2～6%接种量，将培养好的一级纯化菌悬液接种至装有低盐基础培养基的100mL三角瓶中，装液量60%，密封，35～37℃培养箱恒温静置厌氧培养15～20小时，得二级纯化菌悬液；

1.4）菌泥制备与保存：将二级纯化菌悬液进行离心，10000rpm离心10min得到菌泥，将菌泥溶解于低盐基础培养基与50%甘油溶液组成的混合液中，得菌泥混合液，将菌泥混合液分装在已灭菌的冻存管中，封口膜密封，冻存于-80℃低温冰箱内，得鼠李糖乳杆菌菌泥冻存管，备用；

2）菌种发酵

2.1）冻存菌泥复苏：取存于低温冰箱内的鼠李糖乳杆菌菌泥冻存管，立即放入35～37℃水浴锅内进行菌种复苏，至冻存管内液体全部融化；每支冻存管菌液接种至含10mL低盐基础培养基的试管中，35～37℃静置密封培养20h，得一级培养菌悬液；

2.2）菌种扩大培养：将一级培养菌悬液按照2～6%的接种量接种至装有低盐基础培养基的三角瓶中，装液量为60%，三角瓶密封，35～37℃静置密封培养16～20小时，得二级培养菌悬液；

2.3）菌种一级发酵：按照2～6%接种量，将二级培养菌悬液接种至装有低盐基础培养基的发酵罐中，装液量为60%，开启发酵罐搅拌桨，转速为100rpm，通气量为0，35～37℃恒温培养10～12小时，得三级培养菌悬液；

2.4）菌种二级发酵：按照2～6%接种量，将三级培养菌悬液接种至装有低盐优化培养基的发酵罐中，装液量为60%，开启发酵罐搅拌桨，转速为100rpm，通气量为0，35～37℃恒温培养，在发酵开始3小时后，通过流加食品级NaOH溶液来维持恒定pH为5.60±0.1，培养至9～11小时时，监测到菌液OD₆₀₀值停止增长，立即停止发酵，并对菌液做降温处理。

3.如权利要求2所述的一种鼠李糖乳杆菌低盐培养方法，其特征在于，步骤1.4）所述的低盐基础培养基与50%甘油溶液的体积比为4:6。

4.如权利要求2所述的一种鼠李糖乳杆菌低盐培养方法，其特征在于，低盐基础培养基与50%甘油溶液组成的混合液与离心前的二级纯化菌悬液的体积比为1:10。