[发明专利]一种汉坦病毒极速荧光PCR检测试剂盒及其引物探针组合

权利要求书

1.一种汉坦病毒极速荧光PCR检测试剂盒，其特征在于：包括提取试剂、扩增试剂和对照试剂；所述的提取试剂由十二烷基肌氨酸钠|月桂酰基肌氨酸钠NLS[(W/V)NLS]、二硫苏糖醇DTT、TE缓冲液、NP-40表面活性剂组成；所述的扩增试剂包括混合汉坦病毒RT-PCR反应液和16孔微流控芯片的检测试剂；所述的对照试剂包含阴性对照和阳性对照；

所述的检测试剂包括成分为RT-PCR反应液，成分为Buffer，2.0mM dNTPs，1U/μL TaqDNA聚合酶，2U/μL M-MLV反转录酶、0.3U/μLRRI和汉坦病毒及人内标基因检测引物探针。

所述的阴性对照包括DEPC水，所述的阳性对照包括含目的基因片段的人工构建假病毒。

2.根据权利要求1所述的一种汉坦病毒极速荧光PCR检测试剂盒，其特征在于：所述的Buffer包括10mM Tris-HCl，15mM KCl，3.5mM MgCl₂。

3.根据权利要求1所述的一种汉坦病毒极速荧光PCR检测试剂盒，其特征在于：所述的提取试剂包括0.1％～1.0％(W/V)NLS、300mM～800mM DTT、1×TE、1％NP-40。

4.根据权利要求1所述的一种汉坦病毒极速荧光PCR检测试剂盒，其特征在于：所述的Taq DNA聚合酶选自Ex Taq HS、Platinum II Taq HS DNA polymerase、AmpliTaq GoldDNA polymerase中的任意一种。

5.根据权利要求1所述的一种汉坦病毒极速荧光PCR检测试剂盒，其特征在于：所述的反转录酶选自PrimerScript II RTase、PrimerScript RTase、Superscript IV中的任意一种。

6.一种根据权利要求1-5中任意一项汉坦病毒极速荧光PCR检测试剂盒的引物探针组合，其特征在于：

所述的汉坦病毒和人内标基因检测引物探针的具体序列和序号如下：

汉坦病毒上游引物F：AGATACAGCAGCAGTTAGCCTC SEQ ID NO.1

汉坦病毒下游引物R：ACTTTCCAGTCTCTGCGC SEQ ID NO.2

汉坦病毒探针P：5’-荧光报告基团-CAGGGACTACTTACGGCAGCGGCA-荧光淬基团-3’SEQID NO.3

人内参基因β-actin基因上游引物F：CGAGCGCGGCTACAGCT SEQ ID NO.4

人内参基因β-actin基因下游引物R：TCCTTAATGTCACGCACGATTT SEQ ID NO.5

人内参基因β-actin基因探针P：5’-荧光报告基团-ACCACCACGGCCGAGCGG-荧光淬基团-3’SEQ ID NO.6。

7.一种根据权利要求6所述的汉坦病毒极速荧光PCR检测试剂盒的引物探针组合，其特征在于：所述的荧光报告基团选自FAM、HEX、ROX、CY3、CY5荧光报告基团，所述的荧光淬基团选自BHQ1、BHQ2、TAMRA、MGB荧光淬灭基团。

8.一种根据权利要求7所述的汉坦病毒极速荧光PCR检测试剂盒的引物探针组合，其特征在于：所述的汉坦病毒和人内标基因5’端分别标记FAM和CY5荧光素，3’端分别标记BHQ1和BHQ2荧光素。

9.一种根据权利要求8所述的汉坦病毒极速荧光PCR检测试剂盒的引物探针组合，其特征在于：每个芯片反应孔内目标病原体检测引物探针浓度比例为500nM～1200nM：300nM～600nM；内参基因引物探针浓度比例为200nM～500nM：100nM～300nM。

10.一种根据权利要求9所述的汉坦病毒极速荧光PCR检测试剂盒的引物探针组合，其特征在于：每个芯片反应孔内目标病原体检测引物探针浓度比例为800nM：400nM；内参基因引物探针浓度比例为400nM：200nM。