[发明专利]检测两个单核苷酸多态性位点的多态性的成套引物及其应用

权利要求书

1.检测两个单核苷酸多态性位点的多态性的成套引物，其特征在于：所述两个单核苷酸多态性位点分别为A位点和B位点，所述A位点和所述B位点位于同一条DNA上，所述A位点位于所述B位点的上游；

所述成套引物由名称为F1O的上游外引物、名称为RO的下游外引物、A位点突变型内引物和B位点突变型内引物组成；

所述F1O是对应于所述A位点的上游区域的单链DNA，进行扩增时所述F10的延伸方向是所述A位点的下游；

所述RO是对应于所述B位点的下游区域的单链DNA，进行扩增时所述RO的延伸方向是所述B位点的上游；

所述A位点突变型内引物是对应于所述A位点的单链DNA，且所述A位点突变型内引物的3′末端核苷酸与所述A位点突变型核苷酸相同，进行扩增时所述A位点突变型内引物的延伸方向是所述A位点的下游；

所述B位点突变型内引物是对应于所述B位点的单链DNA，且所述B位点突变型内引物的3′末端核苷酸与所述B位点突变型核苷酸互补配对，进行扩增时所述B位点突变型内引物的延伸方向是所述B位点的上游。

2.根据权利要求1所述的成套引物，其特征在于：所述A位点和所述B位点之间相距60-260bp。

3.根据权利要求2所述的成套引物，其特征在于：所述A位点和所述B位点之间相距61bp。

4.根据权利要求1-3中任一所述的成套引物，其特征在于：所述A位点为人线粒体全基因组的第1494位和所述B位点为人线粒体全基因组的第1555位。

5.根据权利要求4所述的成套引物，其特征在于：所述F10、所述R0、所述A位点突变型内引物和所述B位点突变型内引物之间的摩尔比为1∶1∶2∶2。

6.检测两个单核苷酸多态性位点的多态性的试剂或试剂盒，其特征在于：所述试剂或试剂盒包括权利要求1至5中任一所述的成套引物；所述两个单核苷酸多态性位点为权利要求1至4中任一所述的成套引物中所述的两个单核苷酸多态性位点。

7.根据权利要求6所述的试剂或试剂盒，其特征在于：所述试剂或试剂盒含有用作质控的A位点野生型和B位点野生型重组载体、A位点突变型重组载体和B位点突变型重组载体。

8.权利要求1至5中任一所述的成套引物在制备检测人基因组中两个单核苷酸多态性位点的试剂或试剂盒中的应用；所述两个单核苷酸多态性位点为权利要求1至4中任一所述的成套引物中所述的两个单核苷酸多态性位点。

9.权利要求1至5中任一所述的成套引物或权利要求6或7所述的试剂或试剂盒在检测人基因组中两个单核苷酸多态性位点中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述成套引物为权利要求4或5所述的成套引物，所述两个单核苷酸多态性位点为权利要求4中所述的成套引物中所述的两个单核苷酸多态性位点，所述应用中包括对待检测样本进行PCR扩增反应的步骤；所述PCR扩增反应采用的引物退火条件为先进行如下10个循环：95℃30s，退火温度30s，72℃30s，其中，退火温度从65℃开始每个循环退火温度降低1℃；再进行如下25个循环：95℃30s，55℃30s，72℃30s；所述待检测样本为外周血液、唾液或口腔拭子。