[发明专利]虎斑乌贼神经肽sCAP及其用途

说明书

本发明提供一种虎斑乌贼神经肽sCAP及其用途，属于神经肽技术领域，sCAP基因总长度为666bp的cDNA序列，包括109bp的5′‑UTR、296bp的3′‑UTR以及261bp的开放阅读框ORF，一共编码86个氨基酸，MW为9.3kDa，pI8.52。构建含有神经肽sCAP基因的载体，导入宿主菌rosetta后诱导表达，经扩大培养后收集重组蛋白即可应用于虎斑乌贼的生殖调控中。有益效果为：喂养或者喷洒含有虎斑乌贼sCAP基因重组蛋白溶液后，虎斑乌贼的活动能力、摄食能力、免疫能力更为优异，对虎斑乌贼养殖过程中的生殖调控应用具有指导意义。

技术领域

本发明属于神经肽技术领域，具体涉及虎斑乌贼神经肽sCAP及其用途。

背景技术

目前关于头足类神经肽的研究主要集中在如GnRH、FaRPs和APGWamide等小分子多肽方面，而在生理调节过程中意义重大的小分子肽——sCAP研究较少。Lloyd等最早对软体动物中散大蜗牛的CAP的分布特征进行了鉴定。sCAP在刺激心脏运动、控制肌肉收缩、输卵管收缩、增强后肠收缩及生物蜕皮等生理过程中发挥着重要作用。在头足类中，sCAP最初发现于长蛸(Octopus minor)的脑组织中，有Ocp-1、Ocp-2、Ocp-3和Ocp-4四种类型。其相关类似物oct-SCPRP也被发现于真蛸中，具有收缩牙齿及舌头牵拉肌的作用。有研究表明Ocp-1和Ocp-2是非洲大蜗牛中Achatin-I的同源基因产物，Ocp-1可通过影响红螺(Rapanathomasiana)中谷氨酸含量刺激心脏收缩。

本发明方法利用RACE(Rapid-amplification of cDNA ends)克隆获得虎斑乌贼sCAP(以下简称SpsCAP)全长序列并开展生物信息学分析，并用多种生物软件对该神经肽基因进行了生物学分析，采用qPCR技术研究sCAP基因在虎斑乌贼成熟的雌性个体和雄性个体不同组织中表达的差异性，进而推测sCAP基因在乌贼中的可能生理功能，并为虎斑乌贼的种质资源保护和开发奠定一定理论基础，为乌贼人工养殖和育种工作提供一定的理论支持。

发明内容

本发明的目的在于提供虎斑乌贼神经肽sCAP及其用途，运用分子生物学手段分析了虎斑乌贼神经肽的基因序列、基因的组织表达特异性，并对其在虎斑乌贼各组织中的特异表达位点进行了细胞定位，对虎斑乌贼的生殖活动具有较高的调控能力，为虎斑乌贼的种质资源保护和人工繁育提供一定的理论基础。

本发明为实现上述目的所采取的技术方案为：

一种虎斑乌贼神经肽sCAP，sCAP基因总长度为666bp的cDNA序列，其cDNA序列如SEQ ID NO.1所示，包括109bp的5′-UTR、296bp的3′-UTR以及261bp的开放阅读框ORF，一共编码86个氨基酸，其序列如SEQ ID NO.2所示，MW为9.3kDa，pI8.52。信号肽位于1号及20号氨基酸之间，该蛋白含有明显跨膜区结构，对该蛋白的二级结构分析发现，它含有33.72％的延伸链、66.28％的无规则卷曲结构，亲水性分析显示该蛋白中含有28个亲水性氨基酸和58个疏水性氨基酸，为亲水性蛋白。

虎斑乌贼sCAP同源性氨基酸序列比对发现，虎斑乌贼与曼氏无针乌贼的相似度最高，其次是商乌贼；构建系统进化树分析发现，虎斑乌贼sCAP基因的进化关系与曼氏无针乌贼以及商乌贼最近，并且与软体动物聚为一类。