[发明专利]卵形鲳鲹亲子鉴定的SSR荧光标记引物及应用

权利要求书

1.一种用于卵形鲳鲹亲子鉴定的SSR荧光标记引物，其特征是包括13对特异性引物，分别为引物对Tov32142、Tov25439、Tov26724、Tov6129、Tov32776、Tov16774、Tov15555、Tov4695、Tov368、Tov82、Tov533、Tov530和Tov215，其中：

Tov32142.F、Tov32142.R的序列如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示；

Tov25439.F、Tov25439.R的序列如SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示；

Tov26724.F、Tov26724.R的序列如SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示；

Tov6129.F、Tov6129.R的序列如SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8所示；

Tov32776.F、Tov32776.R的序列如SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10所示；

Tov16774.F、Tov16774.R的序列如SEQ ID NO：11和SEQ ID NO：12所示；

Tov15555.F、Tov15555.R的序列如SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：14所示；

Tov4695.F、Tov4695.R的序列如SEQ ID NO：15和SEQ ID NO：16所示；

Tov368.F、Tov368.R的序列如SEQ ID NO：17和SEQ ID NO：18所示；

Tov82.F、Tov82.R的序列如SEQ ID NO：19和SEQ ID NO：20所示；

Tov533.F、Tov533.R的序列如SEQ ID NO：21和SEQ ID NO：22所示；

Tov530.F、Tov530.R的序列如SEQ ID NO：23和SEQ ID NO：24所示；

Tov215.F、Tov215.R的序列如SEQ ID NO：25和SEQ ID NO：26所示。

2.一种卵形鲳鲹微卫星荧光多重PCR的方法，其特征是包括以下步骤：

(1)提取卵形鲳鲹DNA：采集卵形鲳鲹亲本样品和子代样品，提取基因组DNA；

(2)合成特异性引物：筛选并合成权利要求1中的13对特异性引物，所述13对特异性引物共分为二组，分别为V1组和G36组，其中V1组包括引物对Tov32142、Tov25439、Tov26724、Tov6129、Tov32776、Tov16774、Tov15555、Tov4695和荧光标记的通用引物，G36组包括引物对Tov368、Tov82、Tov533、Tov530、Tov215和荧光标记的通用引物，用于PCR分析；

(3)多重PCR扩增：采用荧光PCR反应分别利用步骤(2)中的两组引物对步骤(1)中的基因组DNA进行PCR扩增；

(4)亲子鉴定：对扩增产物进行基因分型，利用基因分型结果对亲本基因型和子代基因型进行分析，判定子代个体的父母本；

步骤(2)中V1组微卫星位点扩增的特异引物对和荧光标记通用引物如下表1：

表1 V1组微卫星位点扩增的特异引物对和荧光标记通用引物

步骤(3)中V1组多重PCR扩增体系如下表2：

表2 V1组多重PCR扩增体系

步骤(2)中G36组微卫星位点扩增的特异引物对和荧光标记通用引物如下表3：

表3 G36组微卫星位点扩增的特异引物对和荧光标记通用引物

步骤(3)中G36组多重PCR扩增体系如下表4：

表4 G36组多重PCR扩增体系

步骤(3)中荧光PCR反应时，扩增程序为98℃ 10s，57℃ 40s，72℃ 60s，35个循环；98℃10s，53℃ 40s，72℃ 60s，15个循环；最后72℃延伸30min，4℃保存；

步骤(4)中对扩增产物在ABI3730XL基因分析仪上进行基因分型。

3.权利要求1所述的SSR荧光标记引物在卵形鲳鲹亲子鉴定中的应用。