[发明专利]尿液中二甲苯代谢物的检测方法

说明书

本发明公开了一种尿液中二甲苯代谢物的检测方法，包括如下步骤：(1)将尿液与溶剂A混合，然后离心，得到上清液；其中，溶剂A选自甲醇和乙腈中的一种或两种；(2)将上清液与溶剂B混合，得到样品液；其中，溶剂B选自超纯水、甲醇和乙腈中的一种或多种；(3)采用液相色谱串联质谱检测样品液中的二甲苯代谢物；其中，二甲苯代谢物包括2‑甲基马尿酸、3‑甲基马尿酸和4‑甲基马尿酸。本发明的方法可以同时检测三种以上二甲苯代谢物。

技术领域

本发明涉及一种尿液中代谢物的检测方法，尤其是一种尿液中二甲苯代谢物的检测方法。

背景技术

生物监测是指对血液、尿液等人体生物材料中的化学物质及其代谢物含量或由它们产生的生物效应水平进行监测，可以反映机体不同途径及来源的化学物质的总接触量。二甲苯是工业上应用十分广泛的化学品，包括邻二甲苯、间二甲苯、对二甲苯三种异构体。工业上经常使用此三种异构体的混合物。长期接触二甲苯会对皮肤、内分泌、神经系统等产生有害影响。因此，对二甲苯的暴露水平进行生物监测在职业防护中是非常必要的。然而，目前针对该化合物的体内代谢物的检测方法的报道较少。

CN103837624A公开了一种尿液中苯乙醛酸和苯乙醇酸的液相色谱串联质谱测定方法，将样品经稀释后直接引入液相色谱-电喷雾电离-串联质谱仪进行测定。CN102788852A公开了一种液相色谱-串联质谱法检测人体尿液中芳香胺化合物的方法，采用浓HCl水解尿液，并通过PAH分子印迹柱对样品进行纯化处理，进液相色谱-串联质谱联用仪分析。CN106680393A公开了采用高效液相色谱串联质谱法定量检测尿液样品中环境荷尔蒙(例如邻苯二甲酸单甲基酯)，先用高效液相色谱将经过预净化处理的尿液样本进行初步分离，串联质谱法负离子电喷雾离子化的多离子反应监测模式对目标组分的母离子-子离子对进行扫描，氘代同位素内标法进行准确定量，以标准品浓度与内标品浓度比值为X轴，以标准品响应峰面积与内标品响应峰面积比值为Y轴，建立校正曲线，计算环境荷尔蒙的含量。CN103175921A公开了一种液相色谱串联质谱分析尿液中苯和甲苯四种代谢物的方法。上述方法采用液相色谱串联质谱检测一些芳香族化合物及其代谢物，但均不是二甲苯的代谢物。此外，CN103175921A采用固相萃取法分离代谢物，由于受萃取条件的限制，代谢物的检测也受到限制。

此外，CN106442784A公开了一种人尿中马尿酸、甲基马尿酸及扁桃酸浓度的UPLC-MS/MS检测方法，包括以下步骤：(1)样品的制备:取待测尿液样品于试管或离心管中，加样1/10倍体积的水，涡旋混匀，加与水等量的浓盐酸和水3倍质量的氯化钠，涡旋混匀后，加入样品量5倍的乙酸乙酯萃取，涡旋混匀1min，15000rpm离心10min，取上清，氮气吹干，再加100μL的水复溶，取上清5μL进行样分析；(2)特定条件下UPLC-MS/MS检测样本，(3)根据样品的峰面积和标准曲线的回归方程中，计算尿液中马尿酸、甲基马尿酸及扁桃酸的浓度。上述方法采用液液萃取法分离代谢物，由于受萃取条件和检测条件的限制，仅能检测2-甲基马尿酸和3-甲基马尿酸，而无法全面地检测二甲苯的其他代谢物。

发明内容

有鉴于此，本发明的一个目的在于提供一种尿液中二甲苯代谢物的检测方法，其可以较为全面地检测二甲苯代谢物。本发明另一个目的在于提供一种尿液中4-甲基马尿酸的检测方法，其可以准确检测尿液中的4-甲基马尿酸。

一方面，本发明提供一种尿液中二甲苯代谢物的检测方法，包括如下步骤：

(1)将尿液与溶剂A混合，然后离心，得到上清液；其中，溶剂A选自甲醇和乙腈中的一种或两种；所述尿液与溶剂A的体积比为1:1～20；

(2)将上清液与溶剂B混合，得到样品液；其中，溶剂B选自超纯水、甲醇和乙腈中的一种或多种；所述上清液与溶剂B的体积比为1:0.5～20；

(3)采用液相色谱串联质谱检测样品液中的二甲苯代谢物；其中，二甲苯代谢物包括2-甲基马尿酸、3-甲基马尿酸和4-甲基马尿酸。