[发明专利]与蛋鸭卵泡发育相关的miRNA apla-mir-25-42及其检测引物、抑制物和应用有效
| 申请号： | 201811421003.7 | 申请日： | 2018-11-27 |
| 公开（公告）号： | CN109182562B | 公开（公告）日： | 2021-05-04 |
| 发明（设计）人： | 吴艳;肖红卫;张昊;梁振华;皮劲松;潘爱銮;蒲跃进;孙静;申杰;杜金平;白丁平 | 申请（专利权）人： | 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙) 11371 | 代理人： | 周文波 |
| 地址： | 430000 湖北省武汉市洪山区*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 蛋鸭 卵泡 发育 相关 mirna apla mir 25 42 及其 检测 引物 抑制 应用 | ||
1.一种与蛋鸭卵泡发育相关的miRNA，其特征在于，所述miRNA为apla-mir-25-42，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
2.如权利要求1所述的与蛋鸭卵泡发育相关的miRNA作为分子标志物在检测蛋鸭卵泡颗粒细胞增殖分化状况中的应用。
3.检测如权利要求1所述的与蛋鸭卵泡发育相关的miRNA标志物的引物。
4.根据权利要求3所述的引物，其特征在于，所述引物包括SEQ ID NO:2所示的上游引物、SEQ ID NO:3所示的下游引物和SEQ ID NO:5所示的LOOP引物。
5.一种抑制权利要求1所述的与蛋鸭卵泡发育相关的miRNA结合靶基因的抑制物，其特征在于，所述靶基因为TGFB2基因，所述抑制物与所述miRNA的结合位点为ATCCCCA；
所述抑制物选自TGFB2基因的3’UTR中长约240bp区段；
所述抑制物的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。
6.如权利要求5所述的抑制物，其特征在于，所述抑制物的5’末端和3’末端分别添加限制性酶切位点序列。
7.根据权利要求6所述的抑制物，其特征在于，所述限制性酶切位点序列在酶切后产生粘性末端。
8.根据权利要求7所述的抑制物，其特征在于，所述的限制性酶切位点序列分别为PmeI限制性酶切位点和XhoI限制性酶切位点对应的核苷酸序列。
9.根据权利要求8所述的抑制物，其特征在于，所述PmeI酶切位点位于5’末端，所述XhoI酶切位点位于3’末端。
10.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体包含如权利要求5-9任一项所述的抑制物。
11.如权利要求10所述的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体中的标记基因为双荧光素酶报告基因。
12.根据权利要求11所述的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体是通过将所述抑制物连接到报告载体pmirGLO中获得。
13.如权利要求1所述的miRNA或如权利要求5-9任一项所述的抑制物在蛋鸭卵泡颗粒细胞增殖分化中的应用。
14.一种调控蛋鸭卵泡发育的方法，其特征在于，其包括:向目标蛋鸭卵泡颗粒细胞施用试剂，所述试剂含有作为活性成分的如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:8所示的RNA；
所述调控蛋鸭卵泡发育是指:促进蛋鸭卵泡颗粒细胞增殖或抑制蛋鸭卵泡颗粒细胞调亡。
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