[发明专利]一种线性肽合成方法

说明书

本发明公开了一种线性肽合成方法，将2‑Chlorotrityl Chloride树脂用二氯甲烷、N，N‑二甲基甲酰胺进行活化后采用固相合成方法得到直链肽，使用三氟乙酸、水、苯酚和三异丙基硅烷的混合溶液对树脂进行切割，旋蒸除去三氟乙酸，加入冰乙醚，有白色固体析出，离心后的固体加水溶解，使用冻干机对其冻干，得到固体粉末；构建其中的一对二硫键，7位，20位半胱氨酸选用的巯基保护基为三苯甲基。本发明的有益效果是在保持原本稳定性的基础上，显著提高生物活性，具备穿透细胞膜能力，抗肿瘤活性。

技术领域

本发明属于线性肽合成技术领域，具体涉及一种由L型，D型氨基酸组成的具备了穿透细胞膜能力，抗肿瘤活性的线性肽。

背景技术

NC_H_LH_R_D1自然杂志(DOI:10.1038/nature19791)记载，具有明显的热，酶稳定性。无生物活性。自然界中，野生型多肽稳定性差。全新设计多肽稀缺，生物活性难以控制，穿透细胞膜能力差。

发明内容

本发明的目的在于提供一种线性肽合成方法，本发明的有益效果是在保持原本稳定性的基础上，显著提高生物活性，具备穿透细胞膜能力，抗肿瘤活性。

本发明所采用的技术方案是按照以下步骤进行：

步骤1：将2-Chlorotrityl Chloride树脂用二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺进行活化，后遵循固相合成方法得到直链肽P*LLYWRCLQLrRRpraerkcrrrRRN；

步骤2：使用三氟乙酸、水、苯酚和三异丙基硅烷的混合溶液对树脂进行切割，旋蒸除去三氟乙酸，加入冰乙醚，有白色固体析出，离心后的固体加水溶解，使用冻干机对其冻干，得到固体粉末；

步骤3：构建其中的一对二硫键，7位，20位半胱氨酸选用的巯基保护基为三苯甲基。

进一步，步骤1中用1：1的二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺对树脂进行活化。

进一步，步骤3中三氟乙酸：水：苯酚：三异丙基硅烷＝88：5：5：2。

进一步，步骤4中对7位20位的二硫键进行构建：采用空气氧化法，取50mg的固体粉末，以0.2mg/mL的浓度溶解在150mL 0.2M碳酸氢铵水溶液中，于250mL茄形瓶，电磁搅拌，室温条件下反应48h，使用冻干机得到白色固体粉末。

附图说明

图1是合成方法示意图；

图2是UPROL-10e与MDM2的大分子相互作用数据图；

图3是UPROL-10e对肿瘤细胞HCT116p53+/+作用的柱状图；

Nutlin-3为阳性对照，UPROL，UPROL-4e为阴性对照。

图4是UPROL-10e体外血清稳定性实验，经过4小时的酶解，还有50％的保留量，证明稳定性好

图5是UPROL-10e标记荧光基团后，进入细胞核的情况。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行详细说明。

本发明技术方案如图1所示的合成路线：