[发明专利]博落回二氢苯并菲啶氧化酶基因优化序列及其应用有效
| 申请号： | 201811423211.0 | 申请日： | 2018-11-27 |
| 公开（公告）号： | CN109609522B | 公开（公告）日： | 2020-10-09 |
| 发明（设计）人： | 黄鹏;曾建国 | 申请（专利权）人： | 湖南美可达生物资源股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/53 | 分类号： | C12N15/53;C12N9/06;C12N15/81;C12N1/19;C12P17/18;C12R1/865 |
| 代理公司： | 长沙楚为知识产权代理事务所(普通合伙) 43217 | 代理人： | 陶祥琲 |
| 地址： | 410331 湖南省长*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 博落回二氢苯 氧化酶 基因 优化 序列 及其 应用 | ||
1.采用博落回普罗托品-6-羟基化酶基因优化序列制备血根碱的方法，其特征在于，具体包括如下步骤：
（1）将博落回二氢苯并菲啶氧化酶基因优化序列MC6408opt与辅酶基因序列CuCPR及普罗托品-6-羟基化酶基因序列MC11229分别构建到表达载体PYES2上，然后转入酵母工程菌中，获得含有二氢苯并菲啶氧化酶基因优化序列MC6408opt和辅酶基因序列CuCPR及普罗托品-6-羟基化酶基因序列MC11229的重组表达载体的酵母工程菌株；其中：
所述博落回二氢苯并菲啶氧化酶基因优化序列MC6408opt为对二氢苯并菲啶氧化酶基因序列MC6408进行密码子优化后得到，优化序列MC6408opt的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；MC6408的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；
辅酶基因序列CuCPR的核苷酸序列、氨基酸序列分别如SEQ ID No.4、SEQ ID No.5所示；普罗托品-6-羟基化酶基因序列MC11229的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示；
（2）以pH=8.0的TE缓冲溶液作为前体溶液，加入10μmol/L～2mmol/L原阿片碱作为底物，前体饲喂步骤（1）构建的酵母工程菌株；温度30°下，发酵培养24小时；
（3）收集培养后的酵母工程菌株，裂解菌体、分离纯化，即得。
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