[发明专利]一种假俭草种质的指纹图谱的构建方法及应用

权利要求书

1.一种假俭草种质的指纹图谱的构建方法，包括以下步骤：

(1)分别提取不同种质来源的假俭草样品的基因组DNA；

(2)以各假俭草样品的基因组DNA为模板，以(ACA)₅、(CTG)₁₁、(GAG)₁₀、(CTG)₁₂、(CCT)₇、(CTC)₁₁、(ATC)₁₄、(CTC)₁₀和(CTAC)₁₈SSR分子标记的引物分别进行PCR扩增；

(3)将各样品的PCR扩增结果转化为计算机可识别的数码，得到假俭草种质鉴定的指纹图谱；

所述步骤(1)中，假俭草样品包括全球统一编号为E004、E006、E013、E015、E017、E019、E022、E041、E042、E047、E055、E061、E063、E065、E072、E074、E077、E078、E084、E087、E091、E092-1、E097、E098、E099、E112、E115、E124、E131、E134、E135、E141、E144、E145、E152、E154、E155、E182、E183、E187、E188、E102和E158的假俭草；

所述步骤(2)中，

(ACA)₅SSR分子标记的引物如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示；

(CTG)₁₁SSR分子标记的引物如SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示；

(GAG)₁₀SSR分子标记的引物如SEQ ID No.5和SEQ ID No.6所示；

(CTG)₁₂SSR分子标记的引物如SEQ IDNo.7和SEQ ID No.8所示；

(CCT)₇SSR分子标记的引物如SEQ ID No.9和SEQ ID No.10所示；

(CTC)₁₁SSR分子标记的引物如SEQ ID No.11和SEQ ID No.12所示；

(ATC)₁₄SSR分子标记的引物如SEQ ID No.13和SEQ ID No.14所示；

(CTC)₁₀SSR分子标记的引物如SEQ ID No.15和SEQ ID No.16所示；

(CTAC)₁₈SSR分子标记的引物如SEQ ID No.17和SEQ ID No.18所示。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(2)中，PCR扩增使用的体系每10μL，包括：5μL 2x Taq PCR MasterMix、上下游引物各0.5μL、1.5μL基因组DNA模板和2.5μL超纯水；

所述上游引物或下游引物浓度独立地为10μmol/L，基因组DNA模板的浓度为30ng/μL。

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(2)中，PCR扩增的程序为：95℃预变性3min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，10个循环；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，25个循环；最后72℃延伸7min。

4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(3)中，所述将各样品的PCR扩增结果转化为计算机可识别的数码是：将各样品的PCR扩增结果中，有扩增目的产物的计作“1”、无扩增目的产物的计作“0”、缺失该SSR分子标记位点计作“9”，转化为依次排列的矩阵，得到计算机可识别的假俭草种质鉴定的指纹图谱。

5.权利要求1~4任意一项所述的构建方法在区分假俭草种质中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，按照权利要求1~4任意一项所述的构建方法得到假俭草的指纹图谱，以构建所述指纹图谱时采用的SSR分子标记(ACA)₅、(CTG)₁₁、(GAG)₁₀、(CTG)₁₂、(CCT)₇、(CTC)₁₁、(ATC)₁₄、(CTC)₁₀和(CTAC)₁₈的引物对待测样品的基因组DNA进行PCR扩增，根据扩增结果在指纹图谱中的位置，区分假俭草种质。