[发明专利]基于自催化复制介导的循环信号放大检测人8-羟基鸟嘌呤DNA糖基化酶活性的方法

权利要求书

1.一种检测人8-羟基鸟嘌呤DNA糖基化酶生物传感器，其特征是，包括发夹底物、第一信号探针、第二信号探针、Fok I和人脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶，

所述发夹底物为茎环结构，发夹底物的茎含有互补的有义链和反义链，有义链或反义链中设计受损的鸟嘌呤和能够被Fok I识别的回文序列，受损的鸟嘌呤位于回文序列与环之间，另一条链设计与受损的鸟嘌呤匹配的胞嘧啶；

所述第一信号探针为5'端凸出的茎环结构，第一信号探针的环设计能够被Fok I识别的回文序列，第一信号探针凸出的5'-末端DNA序列上设计与发夹底物的环互补的序列，第一信号探针3'端修饰荧光分子，第一信号探针凸出的5'-末端DNA序列的一个碱基修饰淬灭分子；

所述第二信号探针为5'端凸出的茎环结构，第二信号探针的凸出的5'-末端DNA序列上设计能够被Fok I识别的回文序列，第二信号探针3'端修饰荧光分子，第二信号探针凸出的5'-末端DNA序列的一个碱基修饰淬灭分子，第二信号探针的淬灭分子位于第二信号探针的回文序列与第二信号探针的环之间。

2.如权利要求1所述的生物传感器，其特征是，所述回文序列为：GGATG。

3.如权利要求1所述的生物传感器，其特征是，发夹底物中，受损的鸟嘌呤位于距环2个碱基的位点；

或，发夹底物中，回文序列位于距环4个碱基的位点；

或，发夹底物的环部为4个碱基的DNA序列。

4.如权利要求1所述的生物传感器，其特征是，第一信号探针中，距离5'-末端第7个碱基上修饰淬灭分子；

或，第一信号探针中，5'-末端DNA序列的碱基数为9nt。

5.如权利要求1所述的生物传感器，其特征是，第二信号探针中，距离5'-末端第14个碱基上修饰淬灭分子；

或，第二信号探针中，5'-末端DNA序列的碱基数为18nt。

6.如权利要求1所述的生物传感器，其特征是，发夹底物的序列为：5'-CTA GGA TGCOGT ATT TAC CGC ATC CTA G-3'；

第一信号探针的序列为：5'-GGT AAA TAC GGG ACT TTG TGC ATC CAC AAA GTC CC-3'；

第二信号探针的序列为：5'-TGG ATG CAC AAA GTC CCG ATT GTT CGA TCT CTC GAACA A T-3'。

7.基于自催化复制介导的循环信号放大检测8-羟基鸟嘌呤DNA糖基化酶活性的方法，其特征是，提供权利要求1～6任一所述的生物传感器，由两个连续的反应组成：

(1)hOGG1引发的发夹底物的切割：hOGG1通过切割发夹底物中，脱氧戊糖和受损碱基之间的N-糖苷键，特异性识别并切除受损的鸟嘌呤，产生脱嘌呤/脱嘧啶位点，然后通过APE1的辅助有效切除AP位点，产生单核苷酸间隙，从而导致发夹底物的环部分展开；

(2)自催化复制介导的分子信标级联切割引发的循环信号放大：发夹底物的环序列与MB1凸出的5'端DNA序列杂交，产生第一双链DNA结构，Fok I识别第一双链DNA结构中的回文序列，并使第一双链DNA结构中的MB1分别在其5'和3'端被切割从而释放展开的发夹底物、第一切割产物及荧光分子，释放的展开发夹底物与多余的MB1进行杂交使得MB1循环切割，第一切割产物与MB2凸出的5'端DNA序列杂交，产生第二双链DNA结构，Fok I识别第二双链DNA结构中的回文序列，并使第而双链DNA结构中的MB2分别在其5'和3'端被切割从而释放展开的第一切割产物、第二切割产物及荧光分子，释放的第一切割产物与多余的MB2进行杂交使得MB2循环切割，使得最终产生明显放大的荧光信号。