[发明专利]一种提高胶乳比浊试剂检测灵敏度的方法

权利要求书

1.一种提高胶乳比浊试剂检测灵敏度的方法，其特征在于，具体步骤如下：

(1)将双链单特异性抗体与羧基胶乳共价偶联，在封闭前的胶乳溶液中加入尿素，使胶乳溶液中尿素终浓度达到10-20mM/L；37度恒温摇床，120rpm温和旋转混匀孵育1小时，获得胶乳试剂；

(2)将中部酸性，两端含半胱氨酸的环肽的氨基酸支架，室温溶解于支架溶解液中；所述氨基酸支架的用量为：每mg抗体对应0.010-0.020mg氨基酸支架；

所述氨基酸支架序列如式Ⅰ所示，K为赖氨酸，C为半胱氨酸，X为3-4个自由组合的酸性氨基酸；

(3)对步骤(1)获得的胶乳试剂去除50％背景缓冲液，即换液50％，加入步骤(2)所述溶解有氨基酸支架的溶液，使每mg抗体对应0.010-0.020mg氨基酸支架并混匀；向前述混合有氨基酸支架的胶乳试剂中滴加50mmol/L的过硫酸钾溶液，所述过硫酸钾的摩尔量为步骤(1)中尿素量的35-50％；

(4)将步骤(3)滴加了过硫酸钾溶液的胶乳试剂于37度恒温摇床，120rpm温和旋转混匀孵育30min；

(5)将步骤(4)孵育后的胶乳试剂进行封闭并换液清洗去除残留氨基酸支架、尿素和过硫酸钾，制得成品试剂R2。

2.根据权利要求1所述的一种提高胶乳比浊试剂检测灵敏度的方法，其特征在于，步骤(1)所述胶乳溶液中尿素终浓度为20mM/L。

3.根据权利要求1所述的一种提高胶乳比浊试剂检测灵敏度的方法，其特征在于，步骤(2)所述支架溶解液为100mM/L pH7.5，含0.1％v/V吐温-20的PBS缓冲液。

4.根据权利要求1所述的一种提高胶乳比浊试剂检测灵敏度的方法，其特征在于，步骤(2)所述氨基酸支架的用量为：每mg抗体对应0.015mg氨基酸支架。

5.根据权利要求1所述的一种提高胶乳比浊试剂检测灵敏度的方法，其特征在于，步骤(2)所述酸性氨基酸为天冬氨酸D和/或谷氨酸E。

6.根据权利要求5所述的一种提高胶乳比浊试剂检测灵敏度的方法，其特征在于，步骤(2)所述X为DDD，EEE，DED，EDE，EDD，DDE，EED，DEE，DDDD，EDDD，DEDD，DDED，DDDE，EEDD，EEED，EEEE，DDEE，DEDE，DEEE，EDEE，EEDE，EDED，DEED或EDDE。

7.根据权利要求1所述的一种提高胶乳比浊试剂检测灵敏度的方法，其特征在于，步骤(3)所述换液方法为离心、透析、层析柱或超滤换液。

8.根据权利要求1所述的一种提高胶乳比浊试剂检测灵敏度的方法，其特征在于，步骤(3)所述过硫酸钾的摩尔量为步骤(1)中尿素量的50％。

9.根据权利要求1所述的一种提高胶乳比浊试剂检测灵敏度的方法，其特征在于，步骤(3)所述50mmol/L过硫酸钾溶液为用200ml支架溶解液溶解2.7032g过硫酸钾得到。

10.根据权利要求1所述的一种提高胶乳比浊试剂检测灵敏度的方法，其特征在于，步骤(5)所述封闭并换液清洗的具体步骤如下：将步骤(4)孵育后的胶乳试剂，22000rpm离心15min，去上清，加入封闭清洗液复溶，使胶乳终浓度为1-4g/L，室温混匀2小时，制得成品试剂R2。