[发明专利]一种利用蛋白酶抑制剂提高拟南芥幼苗玻璃化法冻存效果的方法

权利要求书

1.一种利用蛋白酶抑制剂提高拟南芥幼苗玻璃化法冻存效果的方法，其特征在于，采用玻璃化超低温保存的方法对拟南芥幼苗进行保存，具体步骤如下：

A、预培养：将拟南芥种子播在预培养基上，进行春化，然后光照培养；

B、装载液处理：室温下，将步骤A处理后拟南芥幼苗放置在装载液中浸泡处理40～60分钟后去除装载液；

C、玻璃化溶液处理：将步骤B处理后的拟南芥幼苗在0～25℃下使用玻璃化溶液浸泡脱水处理40～60分钟；

D、液氮保存：经步骤C处理后，保持拟南芥幼苗浸泡在玻璃化溶液中的状态，并将其置于液氮中保存；

所述玻璃化溶液中添加0～25μL/mL的SPI；所述SPI的添加浓度不为0μL/mL。

2.如权利要求1所述利用蛋白酶抑制剂提高拟南芥幼苗玻璃化法冻存效果的方法，其特征在于，步骤A中，所述预培养基为含有0.4～0.8mol/L蔗糖的MS固体培养基。

3.如权利要求1所述利用蛋白酶抑制剂提高拟南芥幼苗玻璃化法冻存效果的方法，其特征在于，步骤A中，所述春化条件包括：0～10℃下春化2-4天；所述光照培养的条件包括：20-30℃下光照培养50-70h。

4.如权利要求1所述利用蛋白酶抑制剂提高拟南芥幼苗玻璃化法冻存效果的方法，其特征在于，步骤B中，所述装载液为含有1～2mol/L丙三醇、0.3～0.5mol/L蔗糖的MS培养液。

5.如权利要求1所述利用蛋白酶抑制剂提高拟南芥幼苗玻璃化法冻存效果的方法，其特征在于，步骤C中，所述玻璃化溶液为含有300g/L丙三醇，150g/L乙二醇，150g/L二甲基亚砜、0.4mol/L蔗糖的MS培养液。

6.一种拟南芥幼苗的解冻及再培养方法，其特征在于，包括如下步骤：

将采用权利要求1～5任一项所述方法保存的拟南芥幼苗从液氮中取出，先水浴解冻，然后去除玻璃化溶液后用洗涤液洗涤，最后转入恢复培养基中恢复培养。

7.如权利要求6所述的拟南芥幼苗的解冻及再培养方法，其特征在于，所述水浴解冻的条件为在40℃的水浴中解冻90s。

8.如权利要求6所述的拟南芥幼苗的解冻及再培养方法，其特征在于，所述洗涤液为含有1.0～1.5mol/L蔗糖的MS培养液，所述洗涤方法为：用洗涤液在室温下将拟南芥幼苗浸泡40分钟。

9.如权利要求6所述的拟南芥幼苗的解冻及再培养方法，其特征在于，所述恢复培养基为含有30g/L蔗糖的MS培养基。