[发明专利]一种瑶药甜叶悬钩子脱毒苗的快繁方法

权利要求书

1.一种瑶药甜叶悬钩子脱毒苗的快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）野生植株枝条的采集；

（2）对枝条叶芽的灭菌及高温钝化脱毒：将所述枝条的叶片先剪去，再切取长4-5cm且带一个以上叶芽的茎段，分别置于250ml的烧杯中，再加150ml清水及少量的灭菌洗衣粉茎段，振荡1分钟，静置2h后，用镊子取出用自来水冲洗干净，再置于干净的接种碟中，接着送入恒温箱中高温钝化脱毒；

（3）灭菌及初代培养：于无菌工作台中，进行灭菌处理，后在接种碟中从茎段切下叶芽，先剥去叶芽外的鳞片，切取1-2mm的茎尖作为外植体，再转入甜叶悬钩子初代培养基中进行初代培养；

（4）继代培养与快速增殖：待所述芽丛长到3-4cm时，转入甜叶悬钩子继代培养基中进行继代培养；

（5）诱导生根：待所述芽丛增殖长大株高达到5-6cm时，将植株转入甜叶悬钩子诱导生根培养基，进行诱导生根，得到脱毒试管苗；

（6）将脱毒试管苗进行移栽、假植移栽，并对假植苗进行管理即可得到脱毒组培苗。

2.根据权利要求1所述瑶药甜叶悬钩子脱毒苗的快繁方法，其特征是，所述步骤(1)中，在每年7-8月进行野生枝条的采集，剪取25-30cm长且带多个长1.5-2.5cm的叶芽的枝条。

3.根据权利要求1所述瑶药甜叶悬钩子脱毒苗的快繁方法，其特征是，所述步骤(2)中，所述高温钝化脱毒，温度39℃，时间为2h。

4.根据权利要求1所述瑶药甜叶悬钩子脱毒苗的快繁方法，其特征是，所述步骤(3)的初代培养基在MS培养基的基础上含有以下成分：

0.6-1.0mg/L6-BA+1.0-1.5mg/LKT+0.1-0.25mg/LNAA+10mg/LVc+4.5-4.8%蔗糖+0.57-0.6%琼脂+0.5g/L活性炭 PH5.5-5.8。

5.根据权利要求1所述瑶药甜叶悬钩子脱毒苗的快繁方法，其特征是，所述步骤(4)的继代培养基在MS培养基的基础上含有以下成分：

0.8-1.2mg/L6-BA+1.5-2.0mg/LGA3+0.1-0.15mg/LNAA+10mg/LVc+4.5-4.8%蔗糖+0.57-0.6%琼脂+1.0g/L 活性炭PH5.5-5.8。

6.根据权利要求1所述瑶药甜叶悬钩子脱毒苗的快繁方法，其特征是，所述步骤(5)的诱导生根培养基在1/2MS培养基的基础上含有以下成分：

0.2-0.5mg/LNAA+0.5-0.8mg/LIBA+4.5-4.8%蔗糖+0.57-0.6%琼脂+1.0g/L活性炭PH5.5-5.8。

7.根据权利要求1-6任一项所述瑶药甜叶悬钩子脱毒苗的快繁方法，其特征是，所述初代培养、继代培养和诱导生根培养都在培养室中进行，培养条件为：温度26-28℃，光照2500-2800Lux，相对湿度80-85%。

8.根据权利要求1所述瑶药甜叶悬钩子脱毒苗的快繁方法，其特征是，所述步骤(4)中，继代培养应不超过8代。

9.根据权利要求1所述瑶药甜叶悬钩子脱毒苗的快繁方法，其特征是，所述移栽练苗为将苗株连同培养瓶一起移至室外环境中放置2-3d,再打开瓶盖2-3d，干燥时雾喷清水保湿。

10.根据权利要求1所述瑶药甜叶悬钩子脱毒苗的快繁方法，其特征是，所述假植移栽为炼苗后将甜叶悬钩子试管苗夹出用清水冲洗干净根部的培养基，摆到有网格的篮子里荫干植表的水份，再假植于营养杯中，并淋透水，所述假植苗的管理为将假植苗放在保湿，保温，防虫的大棚内，做好保水保肥等各项工作。