[发明专利]一种标准化离体培养除虫菊种苗的方法

说明书

本发明提供一种标准化离体培养除虫菊种苗的方法，其主要特征在于利用除虫菊尚未张开的花蕾和种子作为离体培养的外植体材料，花蕾和种子经过灭菌消毒以后，将花蕾接种到花蕾专用诱导培养基上，种子接种到种子专用诱导培养基上诱导，然后进行增殖扩繁、生根培养、炼苗移栽。该方法各步骤均可进行标准化、精准操作，建立和实现除虫菊的标准化生产，适宜工厂化生产。采用该方法得到的种苗能够保持除虫菊母本的优良性状，且不受外植体取材时间的限制，繁殖速度快、成活率高。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种标准化离体培养除虫菊种苗的方法。

背景技术

除虫菊(Tanacetum cinerariifolium)是菊科多年生草本植物，又名白花除虫菊。除虫菊是一种较好的生物农药的原料植物，在云南的种植面积约10万亩，占有世界产量的30％。从其花中能够提取出除虫菊酯，除虫菊酯具有诸多优点，如能迅速将蚊、蝇、蚤、虱等害虫麻痹与击倒；高温强光下容易自然分解；对人类，牲畜等无任何毒副作用；对环境也无污染；对害虫使用不易产生抗性。此外，除虫菊花朵可入药，外用皮肤可治挤癣，并且除虫菊的花朵丰富美丽，其观赏价值的开发潜力巨大，可用来布置花坛、花境，还可以用作鲜切花。

目前种植的除虫菊品种因长年自行留种，使其退化严重，混杂率增加，品质严重下降，利用标准化离体保存复壮技术可从源头把住生产第一关，实现除虫菊的标准化生产。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种标准化离体培养除虫菊种苗的方法，该方法包括以下步骤：

(1)外植体取材及灭菌：选取除虫菊优良品种尚未张开的花蕾和种子作为外植体材料，所选取的外植体材料要求健壮、无病、无虫害；将所选取的外植体材料依次按下述方法消毒灭菌：用3％w/w洗衣粉水清洗干净并放到自来水下流水冲洗10-20min，用70％v/v酒精对外植体材料消毒30s，自来水下流水冲洗10-20min，外植体材料放置在0.1％w/w升汞溶液中浸泡消毒10～15分钟，在浸泡消毒过程中不断地搅拌和振荡，将外植体材料从升汞溶液中取出，再用15％w/w的次氯酸钠溶液浸泡10-20min，在浸泡过程中不断地搅拌和振荡，浸泡完成以后，将外植体材料从次氯酸钠溶液中取出，用无菌水冲洗外植体材料，冲洗次数为3-5遍，冲洗好的外植体材料接种备用；

(2)丛生芽诱导：将冲洗好的外植体材料放到超净工作台中，用接种刀切下外植体褐化的部分，花蕾外植体和种子外植体按如下方式进行丛生芽诱导：

将花蕾外植体接种到花蕾专用诱导培养基上，培养20-30天，得到除虫菊丛生苗，所述花蕾专用诱导培养基为：MS+6-BA 2.0mg/L+TDZ 0.5mg/L+IBA 0.2mg/L+琼脂7g/L+蔗糖30g/L，pH值为5.6，培养条件：温度25℃±1℃，光照强度1000-2000lx，光照时间14h/d；

将种子外植体接种到种子专用诱导培养基上，先暗培养7天后再转入光照培养条件下培养15-30d，得到除虫菊丛生苗，光照培养条件为：温度25℃±1℃，光照强度1000-2000lx，光照时间14h/d，所述种子专用诱导培养基为：MS+GA 1.0mg/L+TDZ 0.1mg/L+IAA0.1mg/L+AgNO₃ 1.0mg/L+琼脂7g/L+蔗糖30g/L，pH值为5.6；

(3)无菌苗增殖：把步骤(2)花蕾外植体和种子外植体经诱导得到的除虫菊丛生苗转接到无菌苗增殖培养基，在温光条件为：温度25℃±1℃，光照强度1000～2000lx，光照时间12h/d，培养20-25天，得到分化扩繁的除虫菊丛生苗，重复此无菌苗增殖过程以后，扩繁得到目标数量的除虫菊丛生苗；所述无菌苗增殖培养基为：MS+6-BA 1.0mg/L+TDZ 0.1mg/L+IBA 0.1mg/L+琼脂7g/L+蔗糖30g/L，pH值为5.6；