[发明专利]降高血压药物尼群地平个体化用药指导基因检测试剂盒

权利要求书

1.一种用于判别降高血压药物尼群地平的用药型的引物组合物，其特征在于，该引物组合包括针对能判别尼群地平的2个SNP标记的PCR引物对和延伸引物，其中，PCR引物序列对选自如SEQ ID NO:1a-2a所示的序列，延伸引物序列选自如SEQ ID NO:1b-2b所示的序列。

2.权利要求1所述的引物组合物，其中所述SNP分别选自：

rs5186、rs1137617。

3.权利要求1所述的引物组合物，其中上述PCR引物序列为核心序列，其在5'端可包括5-15个保护碱基序列，优选为10bp的tag：ACGTTGGATG。

4.权利要求1-3所述的引物组合物，其中延伸引物5'端可增加作为接头的碱基序列，其中优选为1-15个碱基，更优选1-3个碱基。

5.由权利要求1-4的引物组合物所制备的用于判别尼群地平用药型的检测产品，包括：

(1)用于PCR的反应试剂，包括：上述扩增引物对，耐高温的DNA聚合酶，dNTPs，PCR反应缓冲液；

(2)用于PCR产物纯化的试剂；

(3)用于单碱基延伸反应的试剂，包括：上述延伸引物，耐高温的单碱基延伸酶(SAP酶)，ddNTPs，延伸反应缓冲液。

6.权利要求5所述的检测产品，其中还包括用于质谱检测且保护上述SNP组合的载体，优选质谱芯片和质谱仪。

7.使用权利要求1-4的引物组合物，或权利要求5-6的检测产品，进行质谱法判别尼群地平用药型的方法，包括以下步骤：

(1)多重PCR：使用上述PCR引物对，在两个反应体系中，对上述2个SNP位点所在DNA区域同时进行扩增，得到含4处多态位点所在DNA区域的PCR产物；

(2)PCR产物纯化：对步骤(1)得到的PCR产物进行纯化，以减少对后续反应的干扰；

(3)单碱基延伸：使用上述2条特异性的延伸引物，在两个反应体系中，对步骤(2)得到的纯化后PCR产物进行多重单碱基延伸，延伸引物在对应的SNP位点处延伸一个核苷酸，该核苷酸与SNP位点处的基因型互补配对；

(4)延伸产物纯化：对步骤(3)得到的延伸产物进行纯化，以获得高纯的延伸产物，避免盐离子等杂质对后续检测的影响；

(5)质谱仪检测：将步骤(4)得到的纯化产物点在含有基质的靶片上，放入质谱仪进行检测。

8.权利要求7的方法，其中步骤2的纯化过程可以选自碱性磷酸酶消化、碱性磷酸酶和外切酶ExoI消化、切胶纯化、PCR纯化柱过柱。

9.使用权利要求1-4的引物组合物，或权利要求5-6的检测产品，用于指导降高血压药物尼群地平的用药。