[发明专利]PLIN2及定量检测PLIN2的试剂的应用和试剂盒

说明书

本发明涉及PLIN2作为肿瘤耐药检测分子靶点的应用，本发明发现肿瘤耐药细胞株中PLIN2表达量上调，定量检测PLIN2可作为检测肿瘤耐药的用途。化疗仍是肿瘤治疗的主要手段之一，化疗药物耐药性是影响肿瘤患者治疗效果的重大障碍。本发明提供了一种可诊断肿瘤耐药的标志物。

技术领域

本发明属于分子生物学和肿瘤防治领域，更具体而言，本发明涉及预测肿瘤耐药性领域。本发明提供了PLIN2可作为一种检测肿瘤耐药性的应用，利用定量检测PLIN2分子的表达可设计出预测肿瘤耐药性的试剂。

背景技术

恶性肿瘤是危害人类健康的一类疾病，化疗是目前治疗恶性肿瘤的主要手段之一。然而在治疗过程中出现的肿瘤对化疗药物的耐药性是影响肿瘤治疗效果的主要障碍。因此，为了提高肿瘤化疗疗效，对肿瘤耐药机制进行研究找到肿瘤耐药关键靶点，并根据这些靶点进行设计提高肿瘤化疗敏感性的新药是本领域重点研究方向。

PLIN2又称脂肪分化相关蛋白，是脂滴包被蛋白PAT家族蛋白成员之一。人的PLIN2基因位于9p22.1-p22.3，基因总长5003bp。PLIN2蛋白的PAT结构域高度保守，位于N端区域的第1～115位氨基酸。PAT结构域与脂质蓄积以及脂滴、蛋白的稳定有关。在细胞脂质蓄积的过程中PLIN2的表达增加，一方面是因为脂质蓄积诱导其表达，另一方面是由于其定位于脂滴时蛋白质会更加稳定。PLIN2表达增加也会保护脂滴水解。PLIN2可以通过调节脂质储存以维持内质网稳态，进而促进肾癌细胞增殖，特别是在营养和氧气限制的条件下，促进肿瘤细胞的存活(Cancer Discov.2015；5(6):652-67.)。进一步的研究表明，PLIN2高表达是肾癌潜在的诊断标志物(Proteomics Clin Appl.2017；11(11-12).)，PLIN2敲除可以促进肾癌细胞增殖、侵袭和迁移(Int J Oncol.2018；53(1):137-147.)。然而PLIN2是否可以作为检测肿瘤耐药性方面的研究未见报道，本发明首次公开了PLIN2在肿瘤耐药细胞中高表达，定量检测PLIN2表达可以作为检测肿瘤耐药诊断的应用。

发明内容

基于上述肿瘤在化学药物治疗过程中出现的肿瘤耐药问题，本发明的一个目的是提供一种肿瘤耐药的关键基因靶点和蛋白质靶点，为检测肿瘤耐药性提供有效工具。

本发明首先通过定量蛋白质组学技术发现耐药相关靶点分子PLIN2，通过检测不同来源的肿瘤细胞及其耐药株，验证PLIN2在耐药细胞株中高表达，可以作为肿瘤耐药的检测靶点。

本发明中的实验操作通常是按照常规实验条件进行，也可按照实施例中实验条件操作，试剂使用可按照制造厂商所附说明使用。

基于此，本发明提供了一种肿瘤耐药的关键靶点，PLIN2。针对该靶点，本发明一个目的是设计PLIN2定量检测试剂盒。

在本发明的PLIN2定量检测试剂盒，所采用定量检测方法为RNA转录水平上定量检测PLIN2表达水平和蛋白质表达水平上检测PLIN2蛋白质表达水平。

本发明的有益效果是：

由于目前化疗仍是大部分肿瘤的主要治疗手段，肿瘤化疗耐药性现已成为影响肿瘤患者预后的重要因素。本发明公开了一个特异性的分子标志物PLIN2，定量检测PLIN2表达可作为预测肿瘤耐药的重要分子标志物。

具体实施形式

下面结合具体实施例，具体阐述本发明。下列实施例中，未注明的具体条件的实验方法，通常是按照常规条件，如Sambrook等人著，分子克隆：实验室指南(New York：ColdSpring Harbor Laboratory Press,1989)中所述条件，或按照制造厂商所建议的条件。所用溶液中百分比如无特殊说明均为体积比。

实施例1.PLIN2在卵巢癌顺铂耐药细胞中蛋白质水平高表达