[发明专利]一种检测加热不燃烧卷烟总粒相物细菌回复突变实验的方法

说明书

本发明公开一种检测加热不燃烧卷烟总粒相物细菌回复突变实验的方法，包括以下步骤：(1)样品前处理；(2)受试菌的培养；(3)受试菌浓度的确定；(4)S9混合液的配制；(5)受试物的分组；(6)受试物的培养；(7)结果判定。本发明建立了加热不燃烧卷烟总粒相物样品前处理方法，并确定了样品检测剂量，形成了适合加热不燃烧卷烟总粒相物的细菌回复突变试验方法。本发明样品的有效处理、检测剂量的优化设定，使得本发明方法能够准确有效的检测加热不燃烧卷烟总粒相物的遗传毒性。

技术领域

本发明属于烟草制品的安全性生物学效应评价技术领域，特别涉及一种检测加热不燃烧卷烟总粒相物细菌回复突变实验的方法。

背景技术

现今，化学物质及其污染物对人体的潜在危害越来越受到社会的普遍关注与重视。B.N.Ames等于1975年建立并不断发展完善的沙门氏菌回复突变试验(Ames试验)被世界各国及组织广为采用，是目前国际公认的检测新药、食品添加剂,食品包装材料及化妆品等的致突变性、致癌性的首选试验方法。国际烟草科学研究合作中心CORESTA组织于2002年成立了卷烟烟气体外毒理测试工作组，经过工作组大量的文献调研及研究工作，该工作组推荐采用细菌回复突变试验(Ames试验)对卷烟烟气冷凝物潜在的致突变性进行检测。该检测方法目前已经被国内外烟草公司广泛采用。

烟草监管立法的日趋严格以及吸烟与健康研究的深入，导致了烟草公司寻求风险更低、无环境烟气的新型烟草制品。加热非燃烧型卷烟，其特征在于加热烟草而非燃烧烟草，向消费者提供一定的烟草特征感受。加热不燃烧卷烟制品避免了传统卷烟制品燃烧时产生的复杂混合物所带来的危害，现阶段已成为国外烟草公司从传统卷烟制品转向的新方向之一。

检测对象的改变导致样品前处理方法、检测剂量也有所不同，用于检测传统卷烟致突变性的细菌回复突变试验(Ames试验)已不能满足加热不燃烧卷烟制品致突变性检测的需要，且目前国内外研究机构及烟草公司尚未制定加热不燃烧卷烟总粒相物细菌回复突变试验的标准方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测加热不燃烧卷烟烟气总粒相物细菌回复突变实验的方法，其以加热不燃烧卷烟总粒相物作为检测基础，以满足加热不燃烧卷烟制品致突变性检测的需要，能够增强检测结果的准确性，进而更为有效地评价加热不燃烧卷烟制品的安全性。

除非另有说明，本发明所采用的百分数均为体积百分数。

一种检测加热不燃烧卷烟总粒相物细菌回复突变实验的方法，包括以下步骤：

(1)样品前处理：采用直线型吸烟机，在抽吸容量为55.0mL，持续时间3s，抽吸频率为30s的抽吸条件下，连续抽吸10口，用直径为44mm的剑桥滤片捕集，分别于抽吸前、抽吸后称量烟气捕集器的质量，按照公式(1)计算加热不燃烧卷烟总粒相物的质量mTPM；

mTPM＝m₁-m₀ (1)

式中：

m₀——抽吸前烟气捕集器的质量，单位为毫克(mg)；

m₁——抽吸后烟气捕集器的质量，单位为毫克(mg)；

捕集完毕后，将捕集后的剑桥滤片放入50mL的三角瓶中，加入二甲基亚砜，使加热不燃烧卷烟总粒相物在二甲基亚砜中的浓度为40mg/mL；将此三角瓶置于超声仪上超声30min；再用无菌滤纸过滤收集二甲基亚砜萃取液，分装至1mL的冻存管中，-80℃保存待用；

(2)受试菌的培养：将TA98和TA100鼠伤寒沙门氏工程菌分别加入到装有培养基的无菌三角瓶中，置于37℃条件下，静置培养16h或100次/min振荡培养10h；