[发明专利]白及提取物体内原型成分及代谢成分的检测方法

说明书

本发明公开了一种白及提取物体内原型成分及代谢成分的检测方法，该方法包括：大鼠口服白及提取物后，收集血清、尿液、粪便、胆汁生物样品，采用超高效液相色谱‑四级杆飞行时间串联质谱联用(UHPLC‑Q‑TOF‑MS)技术检测和代谢软件分析，确定口服白及提取物后大鼠体内的原型成分和代谢成分，明确白及提取物中化学成分在体内的主要存在形式，为白及创新药物的研制及质量控制提供了参考。

技术领域

本发明涉及药物分析领域，特别涉及一种白及提取物体内原型成分及代谢成分的检测方法。

背景技术

口服用药是中医药治疗的主要手段，现代研究证实，口服药物经胃肠道的上皮细胞进入血液循环系统分布到各组织器官或靶点，并达一定血药浓度时方可产生疗效。在实际研究工作中常见许多中药及其复方在血中未检测出原型药物成分，但药效仍十分显著，推测可能是药物经体内生物转化后产生的代谢成分发挥了治疗作用。由此可见，中药的体内代谢研究对明确中药吸收进入体内成分的存在形式及其代谢途径和机制，进而真正阐明中药起效的作用物质基础具有重要作用。

白及为兰科植物白及Bletilla striata(Thunb.)Reichb.F的干燥块茎，具有收敛止血、清热利湿、消肿生肌之功效，在历版《中国药典》均有收载，主产于贵州、四川、湖南、湖北等省，广泛应用于治疗外伤出血、肺痨吐血、消化道出血、疮疡肿毒、皮肤皲裂等，疗效显著。白及主要含有联苄类、二氢菲类、联菲类、苷类及白及多糖等多种化合物，具有止血、促进伤口愈合、抗溃疡、预防肠粘连、抗菌、抗肿瘤等功效。但现有研究除了白及多糖被证实有止血作用外，白及止血的其它作用物质及作用机制尚不清楚，特别是白及的体内直接作用物质的研究尚属空白，严重制约了白及产品的深层次开发。因此，研究白及提取物吸收进入体内的成分及其存在形式，分析代谢产物结构类型，明确白及药材中体内直接作用的化学成分，可为其创新药物研究及质量控制奠定基础。

发明内容

本发明的目的是为克服现有技术缺陷，提供一种白及提取物体内原型成分及代谢成分的检测方法，

本发明的技术方案如下：

一种白及提取物体内原型成分及代谢成分的检测方法，大鼠口服白及提取物后，制备并收集血清、尿液、粪便、胆汁生物样品之一或组合，采用超高效液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱联用(UHPLC-Q-TOF-MS)技术检测和代谢软件分析，确定口服白及提取物后大鼠体内的原型成分和代谢成分。

其中，口服白及提取物后的大鼠血清样品制备方法包括以下步骤：于末次给药后腹主动脉采血，取全血置于37℃恒温水浴至上层有黄色液体析出，台式离心机离心，取上层血清；将同组各血清混合，以消除个体差异，置于-20℃保存，备用；取大鼠血清，置于离心管中，补加甲醇，涡混震荡后，依次超声处理和离心处理，取上清液于37℃氮气吹干，加入甲醇于吹干的样品中，按上述处理方法加入甲醇二次沉淀蛋白，加入50％甲醇水溶液溶解残留物，涡混震荡后，依次超声处理和离心处理，取上清液UHPLC-Q-TOF MS进样分析。

其中，口服白及提取物后的大鼠尿液样品制备方法包括以下步骤：分别收集12、24、48、72h时间段的尿液，并记录各时间段的尿液体积，置于-20℃保存，备用；样品处理前，等量混合各时间点尿液；取大鼠尿液，置于离心管中，补加甲醇，涡混震荡后，依次超声处理和离心处理，取上清液于37℃氮气吹干，加入甲醇于吹干的样品中，按上述处理方法加入甲醇二次沉淀蛋白，加入50％甲醇水溶液溶解残留物，涡混震荡后，依次超声处理和离心处理，取上清液UHPLC-Q-TOF MS进样分析。