[发明专利]一株异源表达耐热腈水合酶的大肠杆菌重组菌及其应用有效
| 申请号： | 201811438328.6 | 申请日： | 2018-11-28 |
| 公开（公告）号： | CN109251882B | 公开（公告）日： | 2020-12-29 |
| 发明（设计）人： | 周哲敏;刘中美;马东;崔文璟;周丽;郭军玲;张赛兰 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/70;C12N9/88;C12N15/60;C12P17/12;C12P13/02;C12R1/19 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 张勇 |
| 地址： | 214000 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一株异源 表达 耐热 水合 大肠杆菌 重组 及其 应用 | ||
1.一种生产烟酰胺或丙烯酰胺的方法，其特征在于，以异源表达腈水合酶的重组大肠杆菌为发酵菌株，所述腈水合酶来源于温泉热碱芽孢杆菌(Caldalkalibacillusthermarum)TA2.A1；所述腈水合酶的基因是由编码氨基酸序列SEQID NO.1的基因、SEQ ID NO.4所示的间隔序列、编码氨基酸序列SEQ ID NO.2的基因、SEQID NO.4所示的间隔序列和编码氨基酸序列SEQ ID NO.3的基因依次连接而成；所述方法包括以烟腈或丙烯腈作为底物，利用所述重组大肠杆菌作为全细胞催化剂催化所述底物转化生产烟酰胺或丙烯酰胺；所述方法为：
以烟腈为底物，在25-28℃，以0.4-1mol/L的终浓度将烟腈与OD600为8的所述异源表达腈水合酶的重组大肠杆菌菌液混合，当底物消耗完毕后再加入下一批底物，制备烟酰胺；
或，以丙烯腈为底物，在25-28℃，以30-100g/L的终浓度将丙烯腈与OD600为8的所述异源表达腈水合酶的重组大肠杆菌菌液混合，当底物消耗完毕后再加入下一批底物，制备丙烯酰胺。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述腈水合酶以pET系列载体为表达载体，转化至大肠杆菌BL21，获得所述异源表达腈水合酶的重组大肠杆菌。
3.权利要求1或2所述方法在生物、制药、化工、石油、造纸、采矿、纺织、或食品领域制备烟酰胺或丙烯酰胺中的应用。
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