[发明专利]一种展青霉素的净化方法，固相萃取柱及其应用

说明书

本发明涉及一种展青霉素的净化方法，固相萃取柱及其应用。本发明将待净化样品依次通过羧基化的多壁碳纳米管和中性氧化铝，或者将待净化样品依次通过中性氧化铝和羧基化的多壁碳纳米管；从而实现对于展青霉素等生物毒素的净化。本发明适用于各种水果、蔬菜和食品样品的净化检测，杂质去除彻底，方法简便高效。

技术领域

本发明涉及农产品安全检测技术领域，具体地说涉及一种净化生物毒素的方法、固相萃取柱及其应用。

背景技术

展青霉素(patulin,PAT)，又称棒曲霉素，是一种有毒的聚酮类化合物。主要由青霉属(Penicillium)、曲霉属(Aspergillus)、拟青霉属(Paecilomyces)和丝衣霉属(Byssochlamys)中的部分真菌产生。PAT是一种世界范围内的果蔬污染物，在多种果蔬及其制品中都有发现，特别是真菌侵染的果品中腐烂部位PAT含量最高，可高达1000μg/kg以上；整果平均含量可达21～746μg/kg。由于目前加工工艺的限制，当使用发病腐烂的果实作为原材料进行果汁等产品的生产时，PAT就随着生产加工过程进入加工终产品中。此外，加工过程中工序的延误或半成品的暂时滞留，都会造成毒素产生菌的再次生长与产毒，从而形造成二次污染。目前在果汁、果酒等水果制品中有PAT的检出。

PAT具有急性毒性，包括对动物的肺、脑水肿、肝脏、脾脏、肾的损害和免疫系统的毒害作用；也具有慢性毒性，表现在对动物的细胞毒性，基因毒性、免疫毒性和潜在的致癌性；目前PAT已被国际癌症研究机构(International Agency for Research on Cancer,IARC)列为第3类致癌物质。人类饮食中的PAT主要来源于被霉菌污染的苹果和苹果汁。由于PAT在苹果汁生产过程中难以完全去除，世界各国及国际组织制定了果品中PAT的最大残留限量。世界各国对真菌毒素限量的强制性规定进一步推动了真菌毒素检测方法的发展。目前国内外真菌毒素的检测方法标准多采用免疫亲和柱(IAC)结合HPLC或HPLC-MS/MS来准确定量，然而，由于PAT是小分子化合物，免疫原性较差，尚缺少相应的IAC产品。展青霉素的检测属于痕量分析，样品前处理至关重要，其直接关系到结果的准确性和可靠性。目前展青霉素的检测方法主要包括薄层色谱法、高效液相色谱法、气相色谱法和色谱联用技术等。样品提取溶剂主要是乙酸乙酯，乙腈或乙腈和水的混合液。提取液的纯化主要采用无水碳酸钠、C18固相萃取柱、亲水亲脂平衡柱、串联PVPP-C18柱、Mycosep多功能柱等净化方法。行业标准NY/T1650-2008采用液相色谱法测定展青霉素含量。主要采用Mycosep^TM228AflaPat多功能柱对样品进行净化，该法简单、快速、灵敏、准确。但该多功能柱价格昂贵且依赖于进口。而C18固相萃取柱、亲水亲脂平衡柱、串联PVPP-C18柱等都操作相对复杂，经过上样、淋洗和洗脱等过程，耗时，还消耗有机溶剂，而且对样品也有局限性，效果却难以达到Mycosep^TM228AflaPat多功能柱的效果。

目前，尚缺乏一种价格低廉、操作简便、快速的富集净化展青霉素的方法，因此，有必要建立高效且可靠的分析方法来监控农产品中展青霉素的发生及污染情况。

发明内容

本发明的旨在解决现有固相萃取柱技术对农产品中展青霉素检测净化效果差，回收率低，并且试剂较为复杂，不能对各种水果、蔬菜和食品样品进行准确的检测的问题，进而提出一种展青霉素的净化方法，以实现对展青霉素快速高效检测。

本发明研究发现，采用具有大比表面积的纳米材料作为一步净化固相萃取柱的填充材料，对于展青霉素等等真菌毒素的净化较好，与Mycosep^TM228固相萃取柱的净化效果近似或更佳。其中，羧基化的多壁碳纳米管对杂质具有很好的吸附性能，能够显著除去干扰杂质；中性氧化铝可有效去除果蔬中的极性杂质。因此，上述两种填料复配可有效去除样本中的杂质，经处理后的样本十分干净，液相检测无干扰峰，液质检测时基质效应几乎全部去除；连续进样后灵敏度不会有明显变化，三重四级杆质谱仪的离子源仍保持干净。基于上述研究特提出本发明。