[发明专利]通过引物组合物进行质谱法判别拉西地平个体化用药的方法

说明书

本发明提供一种利用不同单核苷酸多态性(SNP)位点具有不同分子量的延伸引物，从而通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI‑TOF MS)同时检测与降高血压药物拉西地平代谢相关的多个位点，最终获得通过引物组合物进行质谱法判别拉西地平个体化用药的方法，其包括：根据待测的6个目的SNP位点分别设计多重扩增引物和延伸引物；配制多重扩增引物反应体系和延伸引物反应体系；在反应体系中，用多套引物同时分别对6个目的SNP位点进行扩增和单碱基延伸反应；将单碱基延伸反应后的产物进行飞行时间质谱分析，根据质谱峰所代表的不同分子量延伸引物的产物，鉴定不同药物代谢相关SNP的基因型，指导降高血压药物拉西地平的用药。本发明能同时检测6个降高血压药物拉西地平代谢相关的SNP位点，并具有成本低、无需合成探针、耗时短、结果分析简单便捷、应用领域极其广泛的优点。

技术领域

本发明属于分子生物学检测领域，涉及一种利用质谱特征峰图检测多重PCR单碱基延伸产物的方法及其产品，该方法可以在2个多重PCR反应中同时检测多个PCR单碱基延伸扩增的寡核苷酸产物。更具体的说，该方法利用不同目的寡核苷酸片段在质谱分型过程中生成的不同的时间飞行质谱特征峰图，针对多个目的SNP位点同时进行检测，指导降高血压药物拉西地平的用药。

背景技术

人类的遗传信息储存在基因组中，2002年国际合作项目人类基因组计划的最终完成，绘制出了人类基因组结构的精细图，为相关研究提供了参考序列。人类基因组序列共由30 亿个碱基组成，大量研究表明，人群中1％的遗传差异大约占基因组序列的0.1％左右，即大约300万个碱基的差异，在人群中超过1％的变异频率。这些差异极有可能是造成两个人之间个体差异的遗传因素。发现这些位点，可广泛地应用于遗传标记的研究、评估个体遗传关系、评估物种进化等研究领域。

在人类基因组中，约90％的差异是以单个核苷酸的形式体现出来的，这样的差异位点被称作单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism，SNP)。SNP具有两个显著的特点：一是数目众多，据估计人类基因组中的SNP数目约在1100万左右，目前NCBI dbSNP数据库中已收录来源于人类基因组的SNP达1083万，其中经过确认的为644万(截至2007 年8月22日)，如此大量的SNP方便了选择合适的位点进行疾病研究，也使得绝大多数基因组区域在SNP覆盖范围内；另外一个特点是SNP位点大多数为双态，即在一个位点上仅有两种表现形式(基因型)，这样很容易就能设计出高通量自动化的检测方法。正因为这两个特点，使得SNP位点越来越受到研究者的青睐，被誉为是继限制性片段长度多态性 (RestrictionFragment Length Polymorphism，RFLP)和短串联重复序列(short tandem repeat， STR)之后的第三代分子标记物。人类基因组计划完成前后，基因组学研究的重点逐渐转向 SNP领域，因此，SNP在遗传标记学、生物群体遗传学、生物分类学、遗传育种学、物种或人类进化学、法科学、药物基因组学等领域都有重要的应用。

心血管疾病是全球人类健康的首要疾病负担。我国心血管病患病率处于持续上升阶段。高血压是最常见的心血管疾病之一，也是心血管病的主要危险因素。推算我国心血管病现患人数2.9亿，其中高血压占2.7亿。约70％的脑卒中和50％的心肌梗死的发生与血压升高有关，至少一半的心血管病死亡与高血压有关。根据历次全国性大规模高血压患病率调查，从 1959年到2012年，大于等于18岁居民高血压患病率已由5.1％上升到25.2％，上升趋势明显，已成为我国重要疾病负担。因此，高血压的防治已经成为预防心血管疾病、保障国民健康的重要需求。