[发明专利]一种维生素A醋酸酯的合成方法

权利要求书

1.一种维生素A醋酸酯的合成方法，其特征在于，该方法包括将羟基维生素A醋酸酯在有机溶剂中以脱水酶作为催化剂进行脱水反应，使得羟基维生素A醋酸酯脱去一份子水并形成共轭双键；所述脱水酶产自有机体假单胞菌属、黄杆菌属、乳杆菌属、链球菌属和芽孢杆菌属中的至少一种菌属；所述脱水酶按照以下方法获得：通过克隆或化学合成法从所述菌属中获得酶基因，将该酶基因引入原核表达载体中得到重组载体，之后将所述重组载体转化至大肠杆菌得到重组菌株，所述重组菌株经发酵、分离纯化后得到所述脱水酶；所述酶基因的基因序列为SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:5或SEQ IDNO:6。

2.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，所述脱水酶产自嗜麦芽寡养单胞菌、嗜冷黄杆菌、植物乳杆菌、酿脓链球菌和纺锤形赖氨酸芽孢杆菌中的至少一种菌种。

3.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，所述发酵的方式为将所述重组菌株在含有50～200μg/mL氨苄青霉素的培养基中于25～40℃、100～300rpm条件下震荡培养至OD600值为0.6～0.8，往菌液中加入诱导剂至终浓度为0.8～1.2mM，继续培养20～30h。

4.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，所述分离纯化的方式为将发酵菌液于0～5℃、5000～7000rpm条件下离心分离，弃去上清液，收集菌体，并将收集的菌体重新悬浮于Tris-HCl缓冲液中，超声波破碎后，于0～5℃、5000～7000rpm条件下再次离心分离，收集上层酶液，该酶液即为脱水酶。

5.根据权利要求1-4中任意一项所述的合成方法，其特征在于，所述脱水酶以固定化酶的形式使用，所述固定化酶包括载体材料以及吸附在所述载体材料上的脱水酶，且所述脱水酶与载体材料的重量比为(1～5)mg:1g。

6.根据权利要求5所述的合成方法，其特征在于，所述脱水酶与载体材料的重量比为2mg:1g。

7.根据权利要求5所述的合成方法，其特征在于，所述固定化酶采用将脱水酶与载体材料在室温下于摇床中固定化反应5～20小时，之后再洗涤干燥制得。

8.根据权利要求5所述的合成方法，其特征在于，所述载体材料选自硅藻土、活性炭、多孔玻璃、硅胶和氧化铝中的至少一种。

9.根据权利要求1-4中任意一项所述的合成方法，其特征在于，当所述脱水酶未固定化使用时，则所述羟基维生素A醋酸酯、有机溶剂和酶的用量比为10g︰(50～150)mL:(15～50)mg；当所述脱水酶以固定化酶的形式使用时，则所述羟基维生素A醋酸酯、有机溶剂和固定化酶的用量比为10g︰(50～150)mL:(3～10)g。

10.根据权利要求1-4中任意一项所述的合成方法，其特征在于，所述脱水反应在减压共沸蒸馏条件下进行；所述脱水反应的温度为20～70℃，时间为4h～10h。

11.根据权利要求10所述的合成方法，其特征在于，所述脱水反应的温度为30℃～60℃，时间为5h～8h。

12.根据权利要求1-4中任意一项所述的合成方法，其特征在于，所述有机溶剂选自C₅～C₈的烷烃、C₅～C₈的环烷烃、C₁～C₈的卤代烃和C₆～C₁₀的芳香烃中的至少一种。

13.根据权利要求12所述的合成方法，其特征在于，所述C₅～C₈的烷烃选自正己烷、正庚烷和正戊烷中的至少一种。