[发明专利]一种野生富硒香菇菌种的驯化方法

权利要求书

1.一种野生富硒香菇菌种的驯化方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、种菇选择：在6～15℃的冬春季节，选取在安徽石台县含富硒土壤山区的树木伴生的发育健壮、菌伞盖厚大、无病虫害、成熟度适当的野生香菇菇体为种菇，并装入无菌纸袋内带回；

S2、种菇预处理：将选取的种菇，去除菇体表面的杂物，并用含75％酒精的棉球对菇体伞盖、菌柄表面进行消毒，再用无菌水漂洗2～4次，并用灭菌的脱脂棉吸干菇体表面水分；

S3、组织分离：在无菌接种室内，将手术刀用酒精灯火焰消毒，待手术刀冷却后，用手术刀将菇体的伞盖、菌柄一分为二，挑取菇体的伞盖与菌柄交界处小块菌肉，置于培养皿中的基础PDA培养基上；

S4、组织培养：将S3步骤中带菇体分离组织的基础PDA培养基的培养皿，移入20～25℃的恒温箱中常规培养10～15天；培养期内，每隔1～2天观察一次，并随时淘汰掉遭霉菌或细菌污染的培养物；

S5、转管培养：用接种针挑选S4步骤中以组织分离培养物为中心的菌丝外边沿1～2厘米处的无污染香菇菌丝以及少量培养基，置于试管中的含树叶汁液、富硒营养液、基础PDA培养基的混合培养基上，再次移入20～25℃的恒温箱中，常规斜面培养10～15天；

S6、斜面复培：挑选S5步骤中、离培养基斜面顶端4～5厘米的香菇菌种，以树叶汁液、富硒营养液、基础PDA培养基的混合物为培养基，常规斜面培养10～15天，最后置于超低温-80～-50℃保藏，即驯化出野生富硒香菇菌种。

2.根据权利要求1所述一种野生富硒香菇菌种的驯化方法，其特征在于，所述S4步骤中的常规培养的时间，以菌丝长满培养皿为准。

3.根据权利要求1所述一种野生富硒香菇菌种的驯化方法，其特征在于，所述S5、S6步骤中的常规斜面培养的时间，以菌丝长满试管的斜面为准。

4.根据权利要求1所述一种野生富硒香菇菌种的驯化方法，其特征在于，在S5步骤中，所述混合培养基，以质量百分比计，其组分包括：树叶汁液5.0％～12.0％、富硒营养液0.5％～3.0％、余量为基础PDA培养基。

5.根据权利要求1所述一种野生富硒香菇菌种的驯化方法，其特征在于，在S6步骤中，所述树叶汁液、富硒营养液、基础PDA培养基的混合物，以质量百分比计，其组分包括：树叶汁液10.0％～18.0％、富硒营养液2.5％～6.0％、余量为基础PDA培养基。

6.根据权利要求1-5任意一项所述的一种野生富硒香菇菌种的驯化方法，其特征在于，所述基础PDA培养基，其制备方法为：称取洗净去皮的马铃薯小块200g，切成小块，加水1000ml，煮沸20分钟后，过滤，在滤汁中补足水分到1000ml；再分别加入琼脂18g、葡萄糖20g、磷酸二氢钾3g、硫酸镁1.5g、维生素10mg，煮沸溶解后，补足水分；最后分装、灭菌、备用，即制得基础PDA培养基。

7.根据权利要求1-5任意一项所述的一种野生富硒香菇菌种的驯化方法，其特征在于，所述树叶汁液，其原料为柞树树叶、栎树树叶、桦树树叶中的一种或多种的混合物。

8.根据权利要求1-5任意一项所述的一种野生富硒香菇菌种的驯化方法，其特征在于，所述富硒营养液为亚硒酸钠溶液。