[发明专利]蟋蟀草平脐蠕孢菌素I及其制备方法与应用、蟋蟀草平脐蠕孢菌素J及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种蟋蟀草平脐蠕孢菌素I，其特征在于，所述蟋蟀草平脐蠕孢菌素I的化学结构式为

2.一种蟋蟀草平脐蠕孢菌素J，其特征在于，所述蟋蟀草平脐蠕孢菌素J的化学结构式为

3.一种如权利要求1所述的蟋蟀草平脐蠕孢菌素I和如权利要求2所述的蟋蟀草平脐蠕孢菌素J的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

发酵蟋蟀草平脐蠕孢菌，用乙酸乙酯对发酵产物进行萃取，将乙酸乙酯萃取液进行第一次正相硅胶柱分离并将第一次正相硅胶柱分离后的第三个洗脱组分进行第二次正相硅胶柱分离，将第二次正相硅胶柱分离后的第二个亚组分进行凝胶柱分离，将凝胶柱分离后的物质进行制备液相色谱纯化，收集含量最高的两个色谱峰组分，得到保留时间在前的蟋蟀草平脐蠕孢菌素J和保留时间在后的蟋蟀草平脐蠕孢菌素I；

其中，第一次正相硅胶柱分离的条件包括：以氯仿和甲醇为洗脱液，按所述氯仿与所述甲醇在所述洗脱液中的浓度梯度为100:0、50:1：20:1、10:1、5:1、1:1以及0:1的比例进行梯度洗脱，每个梯度所用洗脱液的体积为4.5-5.5L，分别得到七个洗脱组分；

第二次正相硅胶柱分离的条件包括：以石油醚和丙酮为洗脱液，所述石油醚与所述丙酮的体积比为10-14:1进行等度洗脱，以每180-220mL为一个洗脱阶段，分别得到六个亚洗脱组分；

凝胶柱分离的条件包括：以600mL的甲醇为洗脱液，以Sephadex LH-20为填料进行洗脱；

制备液相色谱纯化的条件包括：以乙腈和水为洗脱液，按所述乙腈和水的初始浓度为30:70，最终浓度为60:40梯度洗脱20-30min。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，第一次正相硅胶柱分离所用的硅胶为200-300目和/或第二次正相硅胶柱分离所用的硅胶为200-300目。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，制备液相色谱纯化中洗脱流速为8-12mL/min。

6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述蟋蟀草平脐蠕孢菌的发酵包括：将所述蟋蟀草平脐蠕孢菌于马铃薯葡萄糖琼脂固体培养基中第一次培养，然后转入含有马铃薯葡萄糖的液体发酵培养基中第二次培养。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，第一次培养是于23-25℃的条件下培养8-12天；

和/或第二次培养是于27-29℃的条件下培养1-3天，然后再于24-26℃的条件下培养19-21天。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，第二次培养过程中均于转速为150-170r/min的条件下进行。

9.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述蟋蟀草平脐蠕孢菌从马铃薯中分离得到。