[发明专利]一种人乳寡糖的快速轮廓分析方法

权利要求书

1.一种人乳寡糖的快速轮廓分析方法，其特征是：母乳样品经过离心脱脂、沉淀除蛋白后的乳清液直接进样到高效液相色谱-质谱仪器进行分析，获得人乳寡糖组成、结构和相对含量信息；

高效液相色谱使用亲水色谱柱进行人乳寡糖分离。

2.按照权利要求1所述分析方法，其特征是，离心脱脂步骤为：取母乳样品，于0-10℃条件下，500-50000g离心5-500分钟，除去上层脂质；离心除去上层脂质1-5次后，取下层即得脱脂母乳样品。

3.按照权利要求1所述分析方法，其特征是，沉淀除蛋白步骤为：取脱脂母乳样品，加入其1-10倍体积量的有机溶剂混匀，于0-10℃静置1-48小时后，0-10℃条件下500-50000g离心5-500分钟，收集上层清液，离心收集上层清液1-5次后蒸干，得到脱脂除蛋白乳清液样品；

所用有机溶剂为乙醇、丙酮、甲醇、乙腈中的一种或多种。

4.按照权利要求1所述分析方法，其特征是，，其中亲水色谱柱填料为硅胶或极性基团键合相硅胶；

极性基团键合相硅胶中的极性基团为氨基酸、酰胺、氨基、羧基、糖基和两性离子等中的一种或多种。

5.按照权利要求1所述分析方法，其特征是，高效液相色谱流动相为水和有机溶剂、或缓冲盐水溶液和有机溶剂，使用等度或梯度方法进行洗脱；

洗脱液中的有机溶剂有：甲醇，乙腈，乙醇，异丙醇，丙酮中的一种或多种。

6.按照权利要求5所述分析方法，其特征是，所选择缓冲盐类型及其于流动相中的浓度及pH如下之一：

a)甲酸铵缓冲盐，浓度0-200mM，pH 6-10；

b)乙酸铵缓冲盐，浓度0-200mM，pH 6-10；

c)碳酸氢铵缓冲盐，浓度0-200mM，pH 6-10；

d)甲酸添加剂，浓度0-10％；pH 1-6；

e)乙酸添加剂，浓度0-10％；pH 1-6；

f)三氟乙酸添加剂，浓度0-10％；pH 1-6。

7.按照权利要求5或6所述分析方法，其特征是，流动相水或缓冲盐水溶液和有机溶剂作为洗脱液的体积比为5/95～95/5。

8.按照权利要求7所述分析方法，其特征是，色谱柱内径为2.1-4.6mm，流动相的流速为0.1-2BV/min。

9.按照权利要求1所述分析方法，其特征是，质谱为以电喷雾为电离源质谱包括四级杆质量分析器、离子迁移谱质谱、飞行时间质量分析器、四级杆离子阱质量分析器和离子回旋共振质量分析器中的一种或多种；

通过质谱采集一级和二级质谱信息，包括分子量、离子强度，通过分子量可获得寡糖的单糖组成信息，通过二级谱图可获得寡糖结构信息，通过峰强度可获得含量信息；同时根据特征碎片，通过提取m/z 325可获得母亲的分泌型状态，通过提取m/z 348可获取母亲的Lewis血型信息。

10.按照权利要求9所述分析方法，其特征是，寡糖的单糖组成用四位数字表示，第一位数字代表寡糖中含有六碳糖的数目(是葡萄糖和半乳糖数目加和)，第二个数字代表N-乙酰葡萄糖胺的数目，第三个数字代表岩藻糖数目，第四个数字代表唾液酸数目。